生物实验操作

生物实验操作

Hucker 改良的革兰氏染色法鉴定微生物

一、实验器材

1、设备:显微镜(尼康YS100、YS2-H)

2、材料:酒精灯、接种环、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)、载玻片、盖片、擦镜纸、白纸、革兰氏染色液(结晶紫染液、碘液、95%乙醇、番红液)、生理盐水

3、菌种:(1)大肠杆菌;(2)枯草芽孢杆菌

二、实验步骤

1、涂片

取一块洁净载玻片,在载玻片的左、中、右3处各滴加一小滴无菌生理盐水,且均匀分布,用接种环以无菌操作方式分别从大肠杆菌和枯草芽孢杆菌斜面上挑取少许菌苔于左、右一水滴中,从大肠杆菌斜面和枯草芽孢杆菌斜面上各挑取少许菌苔同置于中间一水滴中,分别混匀并涂成薄膜。

2、干燥

室温自然干燥。

3、固定

涂面朝上,通过火焰2-3次。

此操作目的是使细胞质凝固,以固定细胞形态,并使之牢固附着在载玻片上。

4、初染

滴加结晶紫液,以刚好将菌膜覆盖为宜,染色1-2min,水洗。

5、媒染

用碘液冲去残水,并用碘液覆盖约1min,水洗。

6、脱色

用滤纸吸去玻片上的残水,将玻片倾斜,在白色背景下,用滴管流加95%乙醇脱色,直至流出的乙醇无紫色时,立即水洗。

7、复染

用番红液复染约2min,水洗。

8、镜检

干燥后,用油镜观察,比较。

正确结果:菌体被染成深紫色的是革兰氏阳性菌,被染成红色的是革兰氏阴性菌。

三、要求

1、竞赛选题内容应在 2小时内完成;

2、载玻片要洁净无油迹;要用活跃生长期的幼培养物做革兰氏染色;涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性;

3、固定操作中,火焰不宜过热,以玻片不烫手为宜;

4、革兰氏染色结果是否正确,乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节。脱色不足,阴性菌被误染成阳性菌;脱色过度,阳性菌被误染成阴性菌;脱色时间一般为20-30s;

5、显微镜使用时,物镜应从低倍到高倍依次转换;

6、在显微镜视野下观察出两种菌(大肠杆菌;枯草芽孢杆菌)的形态,在混菌中区分革兰氏阴性菌和阳性菌,并作图;

7、写出实验报告,包括实验目的、原理、器材与材料、实验步骤、结果与讨论。

胰蛋白酶比活力的测定

一、实验原理

胰蛋白酶能催化蛋白质的水解,该酶对于由碱性氨基酸(如精氨酸,赖氨酸)的羧基与其他氨基酸所形成的肽键具有高度专一性。本实验利用胰蛋白酶能催化N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)水解生成N-苯甲酰-L-精氨酸(BA)的原理,进行胰蛋白酶的活力测定。由于BAEE在253nm处的紫外吸收远低于BA,而BAEE在胰蛋白酶的催化下逐渐生成BA,反应体系在253nm的紫外吸收值随之增加,因此可以以⊿A253nm来计算胰蛋白酶的酶活力。

胰蛋白酶的酶活力单位定义(底物BAEE):在本实验条件下,以BAEE为底物,每分钟使⊿A253nm增加0.001所需的酶量定义为1个酶活力单位。

二、实验器材

1、设备:分光光度计(UVmini-1240)、旋涡混合器(QL-901)、微量移液器。

2、材料:试管、试管架、石英比色皿、记号笔、枪头(1000微升、200微升、10微升)、5mL移液管、吸耳球、擦镜纸、滤纸、洗瓶、烧杯。

3、试剂:胰蛋白酶样品(浓度为mg/mL,体积为Xml,需用Tris-HCl缓冲液(水)自行稀释指定倍数后测定(这里可以指定几个倍数,视实际酶活力而定))、0.05mol/L pH 7.8 Tris-HCl缓冲液、2mmol/L BAEE。

三、实验步骤

1、取多支试管,分别标号为1、2、3、4…等,1号为空白组,其余为测定组,按照表1顺序加入各相关试剂。

表1. 胰蛋白酶活性测定加样程序 试剂/mL

0.05mol/L,pH 7.8 Tris-HCl缓冲液

待测胰蛋白酶

去离子水

2mmol/L BAEE

总体积 空白组 1.5 — 0.1 1.5 3.1 测定组 1.5 0.1 — 1.5 3.1

2、以空白组校正A253nm值至0,测定组中加入底物液BAEE后,立即混合均匀,用比色皿在UVmini-1240分光光度计上测定光吸收值A253nm,同时记录时

间。

3、每间隔1min读取A253nm值一次,至6min终止读数。

4、通过调节酶的浓度,控制测定组测得⊿A253nm/min在0.05-0.10之间数据视为有效。

5、计算每分钟平均A253nm增加值即⊿A253nm/min。

⊿A253nm =【(A6min-A3min)/3 + (A5min-A2min)/3 + (A4min-A1min)/3】/3

四、要求

1、竞赛选题内容应在 2小时内完成;

2、微量移液器在吸取液体时避免平置、倒置等状态,防止液体流入移液器腔体内;

3、微量移液器用后要调至最大量程放置;

4、测吸光度之前要分别用水和样品润洗比色杯;

5、滤纸用于吸干比色杯上残留的液体,擦镜纸用于擦试比色杯的光面;

6、比色杯用完后要用水清洗干净,并倒扣在平皿上;

7、写出实验报告,包括实验目的、原理、器材与材料、实验步骤、结果与讨论。

8、实验报告需计算出⊿A253nm/min、所用胰蛋白酶的总活力、胰蛋白酶的比活力。

微生物实验操作

油镜的使用和维护

目的:掌握油镜的使用与维护,熟悉油镜的使用原理。 材料:显微镜,拭镜纸,液体石蜡油,二甲苯

原理:油镜的透镜极小,工作焦距最短,光线通过玻璃和空气,由于介质密度不同发生折射,射入镜筒的光线极少,视野暗,物象不清晰。如在玻片与镜头(透镜)之间加上折光率和玻片(n=1.52)相近的香柏油(n=1.515)就可减少光线的折射,加强视野的亮度,获得清晰的物象。

步骤:显微镜油镜的使用和维护

1.将显微镜平稳地安放在实验台适宜处。识别油镜头:标有100×、OIL、HI等字样。

2. 打开电源,用低倍镜对光,打开光圈,调节聚光镜的位置,使视野光线充足。

3. 标本上加镜油一滴,转动粗螺旋,使油镜头缓缓下降,用眼从侧面观察,直到油镜头浸入油中接近玻片为止。

4. 从目镜观察,同时徐徐转动粗螺旋提升,见模糊物象后再用细螺旋调节,直到见到清晰物象为止。

5. 观察完毕,粗螺旋提高镜头,取下标本片,油镜头使用后立即用擦镜纸擦净镜头上的油。如油已干,可在擦镜纸上滴少许二甲苯擦拭,并立即用另一擦镜纸

擦去二甲苯,因二甲苯能溶解镜头上的固定胶以致使镜头脱落。

6.将镜头转呈“八”字,调低聚光器,对号送入柜子内存放。

革兰染色

目的:掌握革兰染色的原理及操作。

材料:干净玻片,接种环,葡萄球菌和大肠杆菌18-24h培养后的混合菌液,酒精灯,一套革兰染液

原理:主要为细胞壁结构的差异。G+三维肽聚糖结构的交联度大,通透性低,脂质少或无,酒精作用使孔径缩小;而G-肽聚糖为二维疏松结构,薄,外膜含大量脂质,易被酒精溶解,使细胞壁通透性增高,结晶紫-碘复合物被酒精溶解而脱色。

步骤:

1. 细菌标本的制作

(1)涂片:无菌操作。取一接种环混合细菌悬液,涂布成直径约1cm的涂片,涂片应薄而均匀。

(2)干燥:涂片最好在室温中自然干燥。必要时可将标本面向上,放在酒精灯上方微火处干燥。

(3)固定:标本面向上,在酒精灯火焰外焰按钟摆的速度来回通过3次,放置待冷后染色。固定的目的是

杀死细菌,使细菌与玻片黏附较牢固。菌体蛋白质变性后,提高与染料的亲和力。

2. 革兰染色

(1)初染:滴加结晶紫染液1-2滴于涂片上,1min钟后用自来水缓缓冲洗。

(2)媒染:滴加碘液1-2滴,1min后用自来水缓缓冲洗。

(3)脱色:加95%酒精数滴,摆动玻片使酒精与细菌充分接触,约20-30s后,立即用自来水缓缓冲洗。

(4)复染:滴加稀释碳酸品红液,30-60s后,自来水缓缓冲洗。

用吸水纸吸干后,用油镜观察。镜检后,载片放入消毒缸。

细菌特殊结构的观察

目的:观察并掌握细菌的形态及特殊结构。

材料:细菌鞭毛、芽孢、荚膜的标本片;革兰阳性菌、革兰阴性菌染色标本片

示教:

革兰阳性菌:葡萄球菌,紫色

革兰阴性菌:大肠杆菌,红色

细菌鞭毛

细菌芽孢

细菌荚膜

细菌的分布

目的:了解细菌在自然界中的分布情况。

材料: 普通琼脂平板培养基、血平板、镊子、无菌棉拭子、革兰染液。

操作步骤:

1.空气中细菌的检查

(1)采用沉降法:取普通琼脂平板培养基1只,任意置一处,启盖约15分钟,再盖上,37oC培养24小时,观察有无细菌生长。

(2)结果判定:培养基表面可见多种大小、形态不一的菌落。

2. 皮肤表面细茵检查

(1)采用涂抹法: 先在平板底面用记号笔分成两区,作标记,将未消毒的手指在平板的1/2处表面轻轻涂抹划线,然后用碘酒、乙醇擦拭手指皮肤,用消毒后的手指在平板另一1/2处进行涂抹,操作完毕,置37℃培养24小时后,取出观察结果。

(2)结果判定:培养基表面有几种大小及形态不同的菌落生长,注意比较消毒前后细菌的生长情况。

3.咽喉部细茵检查

(1)用无菌棉拭子在咽喉部涂抹后,涂在血平板上,并划线分离,37oC培养24小时后观察结果。注意观察平板上菌落种类以及是否有溶血现象,并可挑取菌落进行革兰染色检查。口腔微生物检查也可用无菌牙签直接挑取少量牙垢,制成涂片,进行革兰染色检查。

(2)结果判定:血平板表面有大小和形态不同的菌落,有的菌落周围可见溶血环。牙垢涂片镜检可见革兰阳性菌和革兰阴性菌。

紫外线杀菌实验

目的:掌握紫外线杀菌的原理,熟悉紫外线杀菌实验的操作。材料:大肠杆菌,琼脂平板,无菌回形状纸片,接种环,镊子,紫外灯.

原理:紫外线波长范围为240~280nm,最适的波长为260nm,这与DNA吸收光谱范围相一致。其杀菌原理是紫外线易被核蛋白吸收,使DNA的同一条螺旋体上相邻的碱基形成胸腺嘧啶二聚体,从而干拢DNA的复制,导致细菌死亡或变异。紫外线特点:紫外线的穿透能力弱,不能通过普通玻璃、尘埃。

步骤:

1.平板密集划线接种。

2.在平板上贴无菌回形纸片。

3.UV照射30min(打开平板盖子)。

4.取出回形纸,将回形纸放入消毒缸中。

5.37oC培养24h后观察结果。

细菌代谢产物观察和生长现象

目的:掌握细菌代谢产物的检测和结果的判断。熟悉细菌在各种培养基中的生长现象。

材料:各种生化管,大肠杆菌、伤寒杆菌、产气杆菌、变形杆菌等。

原理:不同菌的酶系统不同,对底物的代谢产物也不同,用生化的实验方法可将产物检测出来,从而对细菌鉴定。

步骤:

一、细菌代谢产物观察

1. 糖发酵实验

将大肠杆菌、伤寒杆菌分别接种在葡萄糖发酵管内,37℃培养18-24h进行观察。培养基中指示剂为溴甲酚紫。

如能分解葡萄糖,则产酸,培养基由原来的紫色变为黄色,记录符合为“+”。如同时还产生气体,则其中

倒置的小管中有气泡出现,记录符合为“⊕”。 如能分解乳糖,则产酸,培养基由原来的紫色变为黄色,记录符合为“+”。如同时还产生气体,则其中倒置的小管中有气泡出现,记录符合为“⊕”。如培养基未变色,仍为紫色,则表明细菌不能分解乳糖不能分解乳糖。记录符合“-”。

2.枸橼酸盐利用实验

该培养基中提供的唯一碳源是枸橼酸钠。指示剂是澳麝香草酚兰。分别接种大肠杆菌和产气杆菌,37℃培养24h进行观察.

若斜面有菌落出现,培养基由原来的绿色变为深兰色,表明细菌能利用枸橼酸钠,记录符合“+”,反之“-”。

3.靛基质吲哚产生实验

能产生色氨酸酶的细菌,可分解蛋白胨水培养基中的色氨酸,产生靛基质。将大肠杆菌和产气杆菌分别接种在蛋白胨水培养基中,37℃培养48h后,每管各加吲哚试剂(对二甲基氨基苯甲醛)3-4滴,若出现红色化合物-玫瑰色吲哚,表明靛基质产生阳性“+”;反之为阴性:“-”。

4. 硫化氢产生实验

有的细菌能分解含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸)产生硫化氢。将大肠杆菌和变形杆菌分别接种在这样的

培养基中,37℃培养18-24h。若培养基中出现黑色沉淀物即为阳性“+”,表明产生的硫化氢与培养基中的铅盐(或铁盐)结合,生成黑色的硫化铅(或硫化铁)。

二、细菌生长现象

1、在液体培养基上生长情况

(1)表面生长:液体清晰,细菌生长在液面形成菌膜。如枯草杆菌。

(2)混浊生长:液体均匀混浊,或有少量沉淀。如大肠埃希菌。

(3)沉淀生长:液体清晰,细菌生长在管底,形成沉淀。如链球菌。

2、在固体培养基上的生长情况

(1)菌苔:在琼脂斜面培养基上长成菌苔。

(2)菌落:在平板上形成肉眼可见的细菌集团,称为菌落。观察时要注意菌落的大小、形状、表面形状、边缘是否整齐、透明度、颜色等,可作为鉴别细菌的依据之一。

(3)色素:水溶性色素和脂溶性色素。

3、在半固体培养基上的生长情况

有鞭毛的细菌,由于能运动,在半固体培养基内沿穿刺线弥漫性生长,使穿刺线变得模糊不清。无鞭毛的

细菌,因为不能运动,接种生仍没穿刺生长,穿刺线与周围界限清楚。

凝集实验(玻片法)

目的:掌握抗原抗体反应的基本原理和特异性,熟悉

凝集反应的操作。

材料:伤寒杆菌A-F群O多价血清、志贺氏痢疾多价

血清、生理盐水、未知菌、玻片。

原理:颗粒性抗原(凝集原)与相应的抗体(凝集素)直接结合,在一定的条件下形成肉眼可见的凝集现象。如红细胞ABO血型的测定,测定细菌的细菌凝集实验。

步骤:

1.取清洁载物玻片一张,用蜡笔划为三格,并注明号码。于第一格和第二格内各加约30ul伤寒杆菌A-F群O多价血清及志贺氏痢疾多价血清,第三格内滴加

约30ul生理盐水。

2. 用接种环挑取待检菌种少许,分别均匀地涂抹于1、2、3格内的液体中。接种环每次使用前后均需经

酒精灯火焰烧灼灭菌。

3. 轻轻摇动玻片,数分钟后用肉眼观察结果,出现灰白色凝集颗粒者即为阳性反应;仍为均匀混悬液者为阴性反应。如结果不够清晰,可将玻片放于低倍显微

镜下观察。

沉淀反应(双扩散)

目的:掌握抗原抗体反应的基本原理和特异性,熟悉沉淀反应的操作。材料:干净玻片,玻璃蜡笔、打孔器、微量加样器、正常人血清IgG、羊抗人IgG

原理:将抗原与抗体分别加到电解质凝胶板相邻的两孔中,抗原与抗体双方自由扩散,在最适当比例处形成抗原抗体复合物(沉淀线)。

步骤:

1.制板:取干净玻片一片,用蜡笔分为三格,用吸管将4-5ml加热溶化的1.5%食盐琼脂充盈中格,制备琼脂板。

2. 打孔:待琼脂板凝固后,用打孔器打孔。孔间距约为5mm。

3. 封底:将打好孔的琼脂板凝板过火焰三次。

4. 加样:用微量加样器在三孔中加入生理盐水,正常人血清IgG和马抗人IgG。每孔加入约10μl。注意:加样时勿使液体溢出和孔内出现气泡。

5. 扩散:将琼脂板放入湿盘内,置37℃温箱中(均保持水平位置),于24小时后观察结果。

药敏实验(纸片法)

目的:掌握纸片法药敏实验方法,熟悉微生物培养,

了解抗生素对细菌的作用机制。了解含药纸片的制备 材料:大肠埃希菌,普通琼脂培养基,无菌镊子,打

孔器(直径6cm),抗生素纸片。

原理:药物在琼脂上扩散,形成浓度涕度,在一定的浓度下,对细菌抑制或杀死,浓度过低,则不能抑制

或杀死。从而形成一定大小的抑菌圈。

步骤:

1.平板上密集划线接种。

2.贴4-5种含抗生素的纸片于平板上。药片与平板边

缘相距至少1.5cm,药片之间相距至少2cm。

3. 37oC培养24h后观察结果。测量抑菌圈直径大小,

判断敏感性。

消毒剂对细菌的影响

目的:掌握含药纸片的制备。熟悉微生物培养,了解消毒剂对细菌的作用机制。

材料:大肠埃希菌,普通琼脂培养基,无菌镊子,打孔器(直径6cm),滤纸纸片(直径约6 mm),70%酒精,金星消毒水,紫药水、红药水。

原理:药物在琼脂上扩散,形成浓度涕度,在一定的浓度下,对细菌抑制或杀死,浓度过低,则不能抑制或杀死。从而形成一定大小的抑菌圈。

步骤:

1.平板上密集划线接种细菌。

2. 将无菌干燥的滤纸片放入各种消毒剂中浸湿,在容器边缘沥干,即为含药的滤纸片。

3. 将以上含药滤纸片贴于平板上,每块贴4种。药片与平板边缘相距至少1.5cm,药片之间相距至少2cm。

4. 37oC培养24h后观察结果。测量抑菌圈直径大小,判断抑菌效果。

(此材料来自精品课程)

生物会考实验操作

高中生物会考实验操作(供学生使用) 试题 1:生物组织中脂肪的鉴定 考查项 目 操 作 要 求 满分值

制片

染色

观察 常规

(1)取一粒花生种子,去掉种皮。 (2) 用左手的三个手指夹住花生的一片子叶, 使花生子叶高于手指之上, 右手持刀片,将子叶削去一层,形成平面。 (3)刀口向内,与花生断面平行,滑行切薄片。 (4)将最薄的几片材料移到载玻片中央。 (1)在花生子叶上滴 2—3 滴苏丹Ⅲ 染液,染色 2—3min 。 (2)用吸水纸吸去花生子叶周围的染液。 (3) 在花生子叶上滴 1—2 滴 50%酒精, 用吸水纸吸去酒精, 并滴上 1—2 滴蒸馏水,盖上盖玻片。 (1)低倍镜下寻找花生子叶薄片的最薄处,移至视野中央,观察已着色 的圆形小颗粒。 (2)高倍镜观察目标。 显微镜复原,清洗器材,整理桌面。 试题 2:观察植物细胞的质壁分离

3分

3分

2分 2分

考查 操 作 要 求 满分值 项目 制作 取紫色洋葱鳞片叶外表皮一小方块,在洁净的载玻片上展 1分 装片 平,盖上盖玻片,制成装片。 观察 正确使用低倍镜, 观察正常洋葱表皮细胞, 找到有紫色液泡 2分 装片 的细胞。 (1) 从盖玻片一侧滴入 2—3 滴 0.3g/mL 蔗糖溶液, 另一侧用吸 质壁 水纸吸引,重复几次,操作正确。 2分 分离 (2)用低倍镜观察,找到发生质壁分离或正在发生质壁分离的 细胞。 (1)用高倍镜或低倍镜 ,找到比较清晰的发生质壁分离的细胞 , 绘图 移到视野正中央。 3分 (2)边观察边绘图,绘 1-2 个发生质壁分离的细胞。 常规 显微镜复原、清洗器材,整理桌面。 2分

绘出质壁分离图:

实验 3 观察植物根尖分生区细胞的有丝分裂

操 作 要 求 满分值

考察项目

一、根尖 的培养

实验前 3~4 天,让洋葱放在广口瓶上,底部接触清水。根长约 5cm 时可用。

(由教师 提前准备)

二、装片 的制作

上午 10 时至下午 2 时, 剪取洋葱根尖 2~3mm, 立即放入盛有质量分数为 15% 的盐酸和体积分数为 95%的酒精溶液的混合液(1:1)的玻璃皿中,室温下

1分

1.解离: 解离 3~5min。 2.漂洗: 待根尖酥软后,用镊子取出,放入盛有清水的玻璃皿中漂洗约 10 min。 3.染色: 把洋葱根尖放进盛有质量浓度为 0.01g/mL 或 0.02g/mL 的龙胆紫溶液的玻璃 皿中染色 3~5min。 4.制片: 用镊子将这段洋葱根尖取出来,放在载玻片上,加一滴清水,并用镊子尖把 洋葱根尖弄碎,盖上盖玻片,在盖玻片上再加一片载玻片。然后,用拇指轻 轻地压载玻片,使细胞分散开来。 三、观察 1.低倍镜 观察: 移走低倍镜,换上高倍镜,用细准焦螺旋和反光镜把视野调整清晰,仔细观 察,找出处于细胞

分裂期中期的细胞,再找出前期、后期、末期的细胞。 把装片放在低倍镜下,慢慢移动装片,找到分生区细胞。

1分 1分 2分

2分

2.高倍镜 观察:

四、 常 规

显微镜复原、清洗器材,整理桌面。

1分

绘出植物细胞有丝分裂中期简图:(2 分)

生物实验操作实验

生物实验操作实验(一)考点及评分表

探究发生在口腔内的化学性消化

主考签字: 监考教师签字:

题目:探究发生在口腔内的化学性消化

实验目的:设计对照实验,探究唾液淀粉酶的消化作用。

材料用具:漱口杯、小烧杯(50ml)2个、量筒(10ml)2个,编上1、2号(10ml)的试管2支、备用试管2支,试管架、滴管、0.5—1%的淀粉浆糊、清水、恒温水浴锅、2%碘液等。 实验步骤: 1、取唾液

(1)用凉开水将口漱净。

(2)略张开口,舌尖抵在下颌门齿的下方(或口中含少许清水),约3分钟,将下唇搁在小烧杯口上,收集唾液。 2、设计实验并实施

(1)用量筒分别量取2ml淀粉溶液;注入编有1、2号的洁净试管中。 (2)再同时向两支试管内分别注入2ml唾液和2ml清水;充分振荡试管。 (3)将两支试管同时放在37℃(教师控制,可调至38-39℃)水浴中保温5—10分钟左右。

(4)同时取出两支试管稍冷却后各加入2滴碘液,振荡两支试管,观察现象。 3、实验现象描述

滴加碘液后,1号试管内液体呈现的颜色是_____________;2号试管内液体呈现的颜色是:____________。(举手示意监考教师检查实验结果、观察现象) 4、分析现象,得出结论:略 根据实验现象分析说明:

1号试管内:__________________________________________________ 2号试管内:__________________________________________________ 5、实验完毕、清洁整理实验器具和试验台(淀粉不要倒掉)。

题目:显微镜观察番茄果肉细胞

姓名: 班级: 学校:

实验内容要点: 1.制作临时装片;

2.用显微镜观察细胞的结构

实验材料用具:新鲜的番茄果实、显微镜(安装好放在实验台上)、洁净的载玻片和盖玻片、镊子、滴管、解剖针、吸水纸、清水、干净的纱布。 实验要求:

1、用纱布擦拭载玻片和盖玻片,用滴管吸取清水,在载玻片中央滴一滴清水; 2、制作番茄果肉细胞的临时装片

用解剖针挑取少许果肉细胞,在载玻片中央的水滴中均匀涂抹(果肉堆积过厚扣分),用镊子夹起盖玻片一端,使另一端先接触水滴,并缓缓盖上盖玻片,无明显气泡。

3、用低倍镜观察番茄果肉细胞(1)正确对光;(2)安放临时装片,调节粗准焦螺

旋找到物像;(3)调节细准焦螺旋,观察番茄果肉细胞。

4、绘图(绘图结束后请举手示意考评教师查看显微镜下的图像)

画成示意图,或者不是显微镜视野观察的图都扣分。错字扣分,没有写图名称的扣分,用箭头标注的扣分。

5、实验完毕,清洁整理材料用具、实验台,显微镜归位。

生物实验操作实验( 二)考点及评分表

观察番茄果肉细胞

合肥市四十五中2014年初中实验生物试题(A)

显微镜观察番茄果肉细胞

班级 学号 姓名

实验内容要点: 1.制作临时装片;

2.用显微镜观察细胞的结构

实验材料用具:新鲜的番茄果实、显微镜(安装好放在实验台上)、洁净的载玻片和盖玻片、镊子、滴管、解剖针、吸水纸、清水、干净的纱布。 实验要求:

1、用纱布擦拭载玻片和盖玻片,用滴管吸取清水,在载玻片中央滴一滴清水; 2、制作番茄果肉细胞的临时装片

用解剖针挑取少许果肉细胞,在载玻片中央的水滴中均匀涂抹(果肉堆积过厚扣分),用镊子夹起盖玻片一端,使另一端先接触水滴,并缓缓盖上盖玻片,无明显气泡。

3、用低倍镜观察番茄果肉细胞(1)正确对光;(2)安放临时装片,调节粗准焦螺

旋找到物像;(3)调节细准焦螺旋,观察番茄果肉细胞。

4、绘图(绘图结束后请举手示意考评教师查看显微镜下的图像)

画成示意图,或者不是显微镜视野观察的图都扣分。错字扣分,没有写图名称的扣分,用箭头标注的扣分。

5、实验完毕,清洁整理材料用具、实验台,显微镜归位。

合肥市四十五中2014年初中实验生物试题(B)

探究发生在口腔内的化学性消化

班级 学号 姓名

实验目的:设计对照实验,探究唾液淀粉酶的消化作用。

材料用具:漱口杯、小烧杯(50ml)2个、量筒(10ml)2个,编上1、2号(10ml)的试管2支、备用试管2支,试管架、滴管、0.5—1%的淀粉浆糊、清水、恒温水浴锅、2%碘液等。 实验步骤: 1、取唾液

(1)用凉开水将口漱净。

(2)略张开口,舌尖抵在下颌门齿的下方(或口中含少许清水),约3分钟,将下唇搁在小烧杯口上,收集唾液。 2、设计实验并实施

(1)用量筒分别量取2ml淀粉溶液;注入编有1、2号的洁净试管中。 (2)再同时向两支试管内分别注入2ml唾液和2ml清水;充分振荡试管。 (3)将两支试管同时放在37℃(教师控制,可调至38-39℃)水浴中保温5—10分钟左右。

(4)同时取出两支试管稍冷却后各加入2滴碘液,振荡两支试管,观察现象。 3、实验现象描述

滴加碘液后,1号试管内液体呈现的颜色是_____________;2号试管内液体呈现的颜色是:____________。(举手示意监考教师检查实验结果、观察现象) 4、分析现象,得出结论:略 根据实验现象分析说明:

1号试管内:__________________________________________________ 2号试管内:__________________________________________________ 5、实验完毕、清洁整理实验器具和试验台(淀粉不要倒掉)。

合肥市2014年初中毕业实验操作考试生物评分表

试题A: 显微镜观察番茄果肉细胞

监考老师:

合肥市2014年初中毕业实验操作考试生物评分表

监考老师:

微生物实验室操作指导

微生物实验室操作指导书目录

(一)安全守则

(二)检验总则

(三)基本技术要求

(四)食品平板菌落计数

(五)食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法

(六)沙门氏菌检验

(七)金黄色葡萄球菌检验

(八)霉菌计数

(九)革兰氏染色

(十)空气中微生物的检验

(十一) 水中微生物的检验

(十二)食品接触面的微生物检验

(十三)蔬菜农残的快速检测

审核:

编制:

(一)安全守则

1 进入实验室工作衣、帽、鞋必须穿戴整齐。

2 在进行高压、干燥、消毒等工作时,工作人员不得擅自离开现场,认真观察温度、时间,蒸馏易挥发、易燃液体时,不准直接加热,应置水浴锅上进行。

3 严禁用口直接吸取药品和菌液,按无菌操作进行,如发生菌液、病原体溅出容器外时,应立即用有效消毒剂进行彻底消毒,安全处理后方能离开现场。

4 工作完毕,两手用清水肥皂洗净,必要时可用(杀菌剂)新洁尔灭、过氧乙酸液浸泡手,然后用水冲洗,工作服应经常清洗,保持整洁,必要时高压消毒。

5 实验完毕,及时清理现场和实验用具,对染菌带毒物品,进行消毒灭菌处理,并填写日常工作记录。

6 每日下班,认真检查水、相关电源是否关闭和正在使用的设备运转是否正常,并认真记录。下班前关好门窗,方可离去。

(二)检验总则

1 主题内容与适用范围

本文规定了微生物检验一般规则。

本文适用于食品中微生物学检验的采样、检验及结果报告。

2 样品的采集

2.1 采样目的

确保采集的样品能代表全部被检验的物质,使检验分析更具代表性。

2.2 采样原则

2.2.1 采集的样品要有代表性,采样时应首先对该批食品原料、加工、运输、贮藏方法条件、周围环境卫生状况等进行详细调查,检查是否有污染源存在,同时能反映全部被检食品的组成、质量和卫生状况。

2.2.2 应设法保持样品原有微生物状况,在进行检验前不得污染,不发生变化。

2.2.3 采样必须遵循无菌操作程,容器必须灭菌,避免环境中微生物污染,容器不得使用煤酚皂溶液,新洁尔灭、酒精等消毒物灭菌,更不能含有此类消毒药物,以避免杀掉样品中的微生物,所用剪、刀、匙用具也需灭菌方可使用。

2.3 采样数量

取样数量的确定,应考虑分析项目的要求、分析方法的要求及被检物的均匀程度三个因素。样品应一式三份,分别供检验、复检及备查使用,每份样品数量一般不少于200g。

根据不同种类采样数量略有不同,实验室检验样品一般为25克。

2.4 采样方法

2.4.1 采取随机抽样的方式。

2.4.2 直接食用的小包装食品,尽可能取原包装,直到检验前不要开封,以防污染。

2.4.3 如为非冷藏易腐食品,应迅速将所采样品冷却至0-4℃。

2.4.4 不要使样品过度潮湿,以防食品中固有的细菌增殖。

2.4.5 在将冷冻食品送到实验室前,要始终保持样品处于冷冻状态。样品一旦融化,不可使其再冻,保持冷却即可。

2.5 样品的保存和运送

2.5.1 样品采集完后,应迅速送往实验室检验,送检过程中一般不超过3h,如路程较远,可保存在1-5℃环境中,如需冷冻者,则在冷冻状态下送检。

2.5.2 冷冻样品应存放在-15℃以下冰箱内;冷却和易腐食品应存放在0-5℃冰箱或冷却库内;其它食品可放在常温冷暗处。

2.5.3 运送冷冻和易腐食品应在包装容器内加适量的冷却剂或冷冻剂。保证途中样品不升温或不融化。

2.5.4 待检样品存放时间一般不应超过36小时。

3 检验样品的制备

3.1 样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。

3.2 检验冷冻样品前应先使其融化。可在0-4℃融化,时间不超过18小时,也可在温度不超过45℃的环境中融化,时间不超过15分钟。

3.3 检验液体或半固体样品前应先将其充分摇匀。如容器已装满,可迅速翻转25次;如未装满,可于7s内以30cm的幅度摇动25次。从混样到检验间隔时间不应超过3分钟。

3.4 开启样品包装前,先将表面擦干净,然后用75%乙醇消毒开启部位及其周围。

3.5 非粘性液体样品可用吸管吸取一定量,然后加入适量的稀释液或培养基内,吸管插入样品内的深度不应超过2.5cm,也不得将吸有样品的吸管浸入稀释液或培养基内。

3.6 粘性液体样品可用灭菌容器称取一定量,然后加入适量的稀释液或培养基。

3.7 固体或半固体样品可用灭菌的均质杯称取一定量,再加适量的稀释液或培养基进行均质,从样品的均质到稀释和接种,相隔时间不应超过15分钟。

4 检验

4.1 实验室收到样品后,首先进行外观检验,及时按照国家标准检验方法进行检验,检验过

程中要认真、负责,严格进行无菌操作,避免环境中微生物污染。

4.2 检验所使用的稀释液、试剂、培养基接触的一切器皿必须经过有效的灭菌。

4.3 实验室所用仪器、设备的性能应定期检查和校正。

4.4 制备试剂和培养基所用的水,应为无离子水或用玻璃器皿蒸馏的蒸馏水。

4.5 检验结束后,所有带菌的培养基、试剂、稀释液和器皿必须尽快灭菌和洗刷。清洗过的器皿不应残留洗涤剂的痕迹。

5 检验记录和结果的报告

5.1 经检验的每份样品都应有完整的检验记录。样品检验过程中所用方法、出现的现象和结果等均要用文字写出试验记录,以作为对结果分析、判定的依据,记录要求详细、清楚、真实、客观、不得涂改和伪造。

5.2 检验结束后,根据检验结果,及时填写检验报告书,签字并经负责人审核签字后发出。

(三)基本技术要求

1 无菌操作要求

微生物实验室工作人员,必须有严格的无菌观念,许多实验要求在无菌的条件下进行,主要原因,一是防止试验操作中人为污染样品,二是保证工作人员安全,防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。要求如下:

1.1 接种细菌时必须穿工作服、带工作帽;

1.2 进行接种食品样品时,必须穿专用的工作服、帽及拖鞋,应放在无菌室缓冲间,工作前经紫外线消毒后使用;

1.3 接种食品样品时,应在进无菌室前用肥皂洗手,然后用酒精棉球将手擦干净;

1.4 进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌,打开包装未使用完的器皿,不能放置后再使用,金属用具应高压灭菌或用酒精点燃烧灼三次后使用;

1.5 从包装中取出吸管时,吸管尖部不能触及试管或平皿边;

1.6 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作,接种细菌活样品时,吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒;

1.7 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝,必要时还要烧到针和环与杆的连接处,接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min,再经火焰烧灼;

1.8 吸管吸取菌液或样品时,应用相应的橡皮头吸取,不得直接用口吸。

2 无菌间使用要求

2.1 无菌间应密封,不得随意打开,并设有与无菌间大小相应的缓冲间及门,另尽量设有的小窗,以备进入无菌间后传递物品。

2.2 无菌间应保持清洁,工作后用煤酚皂液溶液消毒,擦拭工作台面,不得存放与试验无关的物品。

2.3 无菌间使用前后应将门关紧,打开紫外灯,如采用室内悬掉紫外灯消毒时,需30W紫外灯,距离工作台1m处,照射时间不少于30分钟,使用紫外灯,应注意不得直接在紫外线下

操作,以免引起损伤,灯管每隔两周需用酒精球轻轻擦拭,除去上面的灰尘和油垢,以减少紫外线穿透的影响。

2.4 处理和接种食品标本时,进入无菌间操作,不得随意出入,如需要传递物品,可通过小窗传递。

2.5 在无菌间需用安装空调时,则应有过滤装置。

3 消毒灭菌要求

微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等,必须经灭菌后方能使用。

3.1 灭菌前准备

3.1.1 所有需经灭菌的物品首先要清洗晾干,玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密,如用金属筒应将上面气孔打开。

3.1.2 装培养基的三角瓶塞好棉塞,用纸包好,试管盖好盖,注射器须将管芯抽出,用纱布包好。

3.2 装放

3.2.1 大型高压蒸气锅:放置灭菌物品不应超过锅内容积的80%,物品应放置锅内搁架上或铁丝筐中。

3.2.2 手提式高压锅:将物品分别包扎好,直接放入消毒筒内,物品之间不能过挤。

3.3 设备检查

3.3.1 检查门的开关是否灵活,橡皮圈有无损坏,是否平整。

3.3.2 压力表蒸气排尽时是否停留在零位,关好门和盖,通蒸气或加热后,观察是否漏气,压力表与温度计所标示的状况是否吻合,管道有无堵塞。

3.3.3 对有自动电子程序控制装置的灭菌器,使用前应检查规定的程序,是否符合于进行灭菌处理的要求。

3.4 灭菌处理

手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行:

3.4.1 手提式高压锅在主体内加入3L清水,立式高压锅加水16L(重复使用时应将水量补足,水变混浊需要更换)。

3.4.2 手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中(无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用)。

3.4.3 盖好顶盖拧紧,勿使漏气;置灭菌器于火源上加热,立式压力锅通上电源,并打开顶盖上的排气阀放出冷气(水沸腾后排气10~15min)。

3.4.4 关闭排气阀,使蒸气压上升到规定要求,并维持规定时间(按灭菌物品性质与有关情况而定)。

3.4.5 达到规定时间后,对需干燥的物品,立即打开排气阀排出蒸汽,待压力恢复到零时,自然冷却至60℃后开盖取物,如为液体物品,不要打开排气阀,而应立即将锅去除热源,待自然冷却,压力恢复至零,温度降到60℃以下再打开盖取物,以防止突然减压液体剧烈沸腾活容器爆破。

3.5 灭菌温度与时间

3.5.1 压力蒸气灭菌锅灭菌温度与时间见下表:

3.6 灭菌处理:灭菌后物品,按正常情况已属无菌,从灭菌器中取出应仔细检查,以免再度污染。

3.6.1 物品取出,随即检查包装的完整性,若有破坏或棉塞脱掉,不可作为无菌物品使用。

3.6.2 取出的物品,如为包装有明显的水浸者,不可作为无菌物品使用。

3.6.3 培养基或试剂等,应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态,未达到者应废弃。

3.6.4 取出的物品掉落在地或误放不洁之处,或沾有水液,均视为受到污染,不可作为无菌物品使用。

3.6.5 取出的合格灭菌物品,应存放于贮藏室或防尘柜内,严禁与未灭菌物品混放。

3.6.6 凡属合格物品,应标有灭菌日期及有效期限。

3.6.7 每批灭菌处理完成后,记录灭菌品名、数量、温度、时间、操作者。

4 有毒有菌污物处理要求

微生物实验室所用实验器材、培养物等未经消毒处理,一律不得带出实验室。

4.1 经培养的污染材料及废弃物应放在严密的容器或铁丝筐内,并集中存放在指定地点,待统一进行高压灭菌。

4.2 经微生物污染的培养物,必须经121℃,30min高压灭菌。

4.3 染菌后的吸管,使用后放入5%煤酚皂溶液或石炭酸溶液中,最少浸泡24小时,再经121℃,30min高压灭菌。

4.4 涂片染色冲洗片的液体,一般可直接冲入下水道,染色的玻片放入5%煤酚皂液中浸泡24h后,煮沸洗涤。做凝集试验用的玻片或平皿,必须经高压灭菌后洗涤。

4.5 打碎的培养物,立即用5%煤酚皂液或石炭酸喷洒和浸泡被污染部位,浸泡半小时后再擦拭干净。

4.6 污染的工作服或进行烈性菌试验所穿的工作服、帽、口罩等,应放入专用消毒袋内,经高压灭菌后方能洗涤。

5 玻璃器皿的清洗要求

5.1 目的

为了保证微生物实验顺利进行,保证实验结果的准确性,不影响实验进度,必须把器皿彻底清洗干净。

5.2 注意事项

5.2.1 任何洗涤方法,都不应对玻璃器皿有所损伤,不能用有腐蚀作用的化学药剂,也不能使用比玻璃器皿硬度大的物品来擦拭玻璃器皿。

5.2.2 一般新的玻璃器皿用2%的盐酸液浸泡数小时,后用水冲洗干净。

5.2.3 用过的器皿应立即洗涤,放置太久会增加洗涤困难。

5.2.4 强酸、强碱及其它氧化物和有挥发性的有毒物品,都不能倒在洗涤槽内,以免污染环境水质,必须倒在废水缸中。

5.2.5 含有对人体有传染性病菌的器具,应先煮沸灭菌后再进行洗涤。

5.2.6 难洗涤的器皿不要与易洗涤的器皿放在一起,以免增加洗涤的麻烦。有油的器皿不要与无油的器皿混在一起,否则使本来无油的器皿沾上了油垢,浪费药剂和时间。

5.3 洗涤剂的种类:水、洗衣粉、柠檬洗涤剂、肥皂

5.4 洗涤方法

5.4.1 含有琼脂培养基的玻璃器皿的洗涤方法:事先应将器皿中的琼脂刮去,然后用清水洗涤,并用试管刷刷其瓶壁,以除去粘污在壁上的灰尘和油垢。用洗衣粉水洗去油污,然后用自来水冲洗。洗好后的器皿应倒置晾干或置于干燥箱中干燥至无水滴。

5.4.2 载玻片及盖玻片的洗涤法:新载玻片及盖玻片先在20%的盐酸溶液中浸一小时,然后用自来水冲洗2~3次,最后用蒸馏水换洗2~3次。用过的载玻片及盖玻片,应用纸擦去油垢,再放在5%的洗衣粉水中煮30分钟后立即用自来水冲洗,然后放在稀的洗液中浸泡2小时,再用自来水冲洗至中性。

5.4.3 移液管、倒管的洗涤方法:新的移液管及倒管先在的5%盐酸溶液中浸一小时,然后用自来水冲洗几次,最后用蒸馏水换洗几次。用过的移液管、倒管先用自来水洗去表面的残液,再放在洗衣粉水中浸泡一小时以上,再用自来水冲洗至管内壁无残渣,最后用蒸馏水换洗次,晾干后入恒温干燥箱中烘干。

6 培养基、无菌水的制备

6.1 基本原理

培养基的种类很多,不同微生物所需要的培养基不同。培养基制成后的物理状态可分为液体、固体、半固体三种类型。目前所用培养基均为已配制好的生物试剂和纸片。 6.2 器材

三角瓶、试管、烧杯、玻棒、天平、搪瓷杯、量筒、铝箔纸、角匙、杜氏小管、硅胶塞、电炉

6.3 培养基的种类

营养琼脂培养基、乳糖胆盐发酵培养基、乳糖发酵培养基、伊红美兰琼脂培养基、马铃薯-葡萄糖琼脂培养基(附加抗菌素)、平板计数琼脂、月桂基硫酸盐胰蛋白冻肉汤、煌绿乳糖胆盐肉汤、EC肉汤、高盐察氏琼脂、三糖铁琼脂等 6.4 方法步骤 6.4.1 培养基的制备:

6.4.2 称量:根据培养基的配方,称取适量药品于搪瓷杯中;

6.4.3 溶解:用量筒量取所需水量,置电炉上加热,一边搅拌,至完全溶解,加热至沸腾,拔掉电源,待冷却;

6.4.4 分装:根据不同需要,立即趁热分装入三角瓶或试管中,分装三角瓶以不超过三角瓶一半为宜,分装试管一般为管长的1/5(需根据试管的大小而定)。液体培养基如乳糖胆盐发酵培养基约分装10毫升左右。

6.4.5 塞硅胶塞:装好培养基的试管应塞上硅胶塞,松紧合适,紧贴管壁,不留缝隙,约1/2塞入内,这样即可过滤空气,避免杂菌侵入,又可减缓培养基水分的蒸发。 6.4.6 包装:三角瓶棉塞头部应用锡箔纸包扎,试管集中于试管篓。 6.5 无菌水的制备:

6.5.1 用10ml移液管量取9.2ml蒸馏水(稀释水)装入试管中。

6.5.2 用100ml量筒量取95ml蒸馏水(稀释水)装入150ml的三角瓶中。可置少许玻璃珠

于三角瓶内,防止暴沸。

6.5.3 量取240ml蒸馏水(稀释水)于250ml的三角瓶中,塞上瓶塞用牛皮纸包扎好,高压灭菌备用。 7 设备使用原则

7.1 实验设备的使用由实验员严格按照操作说明书进行,其他人员不得随意操作。 7.2 实验设备的日常维护保养由实验员根据设备操作说明书进行,出现不可排除的故障时,经部门总经理批准,商请专业人员维修。

7.3 实验设备应定期进行计量检测,确保仪器的准确性。

7.4 实验员应爱护仪器设备,使用前应检查,使用后应及时清理清洁,并定期维护保养,下班前应检查设备电源是否关闭。

(四)食品平板菌落计数

1 主题内容与适用范围

本文规定了食品平板菌落计数的方法。

本文适用于航空配餐的各种半成品、成品及原料,有专门规定的检验方法的除外。 2 设备和材料

超净工作台、恒温培养箱(36±1℃)、均质器、振荡器、吸管(1ml、10ml)、平皿、稀释瓶、天平等 3 培养基和试剂

平板计数琼脂、75%乙醇、磷酸盐缓冲稀释液 4 操作程序 4.1 样品制备

4.1.1 以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。如有包装,则用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。 4.1.2 制备样品匀液

以无菌操作取25g样品,放入装有225ml稀释剂的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1-2min,制成1:10的样品匀液。如样品均质时间超过2min,应在均质杯外加冰水冷却。 4.2 稀释样品匀液

4.2.1 用10ml灭菌吸管准确吸取1:10的样品匀液10ml,放入装有90ml稀释剂的150ml 稀释瓶中。迅速振摇,将样品混匀,制成1:100的样品匀液。振摇时,幅度为30cm,7s内振摇25次。从容器中吸取样品匀液和以后的稀释操作中,吸管尖不要碰着瓶口。吸入的液体应先高于所要求的刻度,然后提起吸管使其尖端离开液面并贴在容器内壁将液体调至所要求的刻度。 4.3 平板接种

4.3.1 对于每个样品,选用合适的三个连续稀释度的样品液进行平板计数。

4.3.2 分别用灭菌吸管吸取1ml样品液放入作了适宜标志的平皿内。每个稀释度的样品液用两个平皿。

4.3.3 分别加12-15ml平板计数琼脂(约45℃左右)到平皿内。立即将平皿内的样品液和琼脂培养基充分混合。要防止把混合物溅到平皿壁和盖上。同时将平板计数琼脂倾入加有1ml稀释剂的另一灭菌平皿作空白对照。将样品液加入平皿后应立即倾注琼脂培养基,每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过20min。 4.4 培养

待琼脂凝固后将平皿翻转,立即放进36±1℃的恒温培养箱培养48±2h。培养箱应保持一定的湿度,经48h培养的琼脂培养基的失重不得超过15%。 4.5 菌落计数和记录

4.5.1 培养后,立即计数每个平板上的菌落数。25-250个菌落为合适范围。如不能立即计数,应将平板存放于0-4℃,但不得超过24h。

4.5.2 操作者对同一平板复核自己的计数结果,其差异应在5%之内,而其他人对这一平板重复计数,其差异应在10%这内。否则,应找出原因,加以校正。 4.6 计算和记录数字

适宜稀释度的两个平板的菌落数平均值或两个稀释度的平板菌落数平均值乘以相应稀释度倍数计算出每克(毫升)样品中平板菌落数。

记录时,只有在换算到每克(毫升)样品中平板菌落数时,才能定下两位有效数字,第三位数字采用四舍五入的方法记录。也可将样品的平板菌落数记录为10的指数形式。 5 结果报告

报告每克(毫升)样品中平板菌落数或估计的平板菌落数。

注:本文参照SN0168-92《出口食品平板计数》

(五)食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法

1 主题内容与适用范围

本文规定了食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法。 本文适用于航空食品的检验。 2 设备和材料

吸管(1ml、10ml)、恒温培养箱(36±1℃、44.5±0.5℃)、冰箱、均质器、振荡器、平皿、稀释瓶、天平、显微镜等 3 培养基和试剂

月桂基硫酸盐胰蛋白月示(LST)肉汤、煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤、EC肉汤、伊红美蓝琼脂(EMB)、营养琼脂斜面、色氨酸肉汤、MR-PV培养基、Korser氏枸掾酸盐肉汤、结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)、Butterfield氏磷酸盐缓冲稀释液、生理盐水、革兰氏染色液、Kovacs氏靛基质试剂、甲基红指示剂、Voges-pros kauer(V-P)试剂、 4 样品制备

4.1 以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。如有包装,则用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。 4.2 制备样品匀液

以无菌操作取25g样品,放入装有225ml稀释剂的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1-2min,制成1:10的样品匀液。如样品均质时间超过2min,应在均质杯外加冰水冷却。 4.3 稀释样品匀液

用10ml灭菌吸管准确吸取1:10的样品匀液10ml,放入装有90ml稀释剂的150ml 稀释瓶中。迅速振摇,将样品混匀,制成1:100的样品匀液。 5 大肠菌群的测定 5.1 大肠菌群MPN值的测定

5.1.1 对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。每个稀释度接种三管月桂基

硫酸盐胰蛋白月示(LST)肉汤,每管接种1ml。 5.1.2 将接种管置于36±1℃的培养48±2h。

5.1.3 观察试管的产气情况:检查倒管内是否有气泡产生,记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。如所有LST肉汤管均未产气,则可报告为大肠菌群阴性;如有产气者,则进一步作证实试验。

5.2 大肠菌群的证实试验

5.2.1 将所有产气管用直径为3mm的接种环移种到煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管中。 5.2.2 置BGLB肉汤管于36±1℃的培养48±2h。 5.2.3 记录所有BGLB肉汤管的产气管数。

5.2.4 结果报告:按BGLB肉汤产气管数,查MPN表报告每克(毫升)样品中大肠菌群的MPN值。

6 粪大肠菌群测定

6.1 用接种环将所有48±2h内产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中。

6.2 将所有接种的EC肉汤管在30min内放入44.5±0.5℃水浴箱内,培养24±2h。水浴箱的水平面应高于肉汤培养基液面。应以已知为44.5℃产气阳性的大肠杆菌和44.5℃不产气的产气肠杆菌或其他大肠菌群细菌作阳性和阴性对照。

6.3 记录EC肉汤管的产气情况。产气管为粪大肠菌群试验阳性;不产气管为粪大肠菌群试验阴性。

6.4 结果报告:按产气管数,查MPN表报告每克(毫升)样品中粪大肠菌群的MPN值。 7 大肠杆菌测定

7.1 将6.3条中的EC肉汤管继续培养24h取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)平板,36±1℃的培养24±2h。

7.2 检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。

7.3 如有典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个典型菌落;如无典型菌落,则从每个平板

上至少挑取2个可疑菌落。用接种针接触菌落中心部位,移种到营养琼脂斜面上,36±1℃的培养18-24h。

7.4 将斜面培养物移种到下列培养基进行生化试验。

7.4.1 色氨酸肉汤:在36±1℃的培养24±2h后,加Kovacs氏试剂0.2-0.3ml,上层出现红色为靛基质阳性反应。

7.4.2 MR-VP培养基:在36±1℃的培养48±2h后。以无菌操作移取培养物1ml至13mm*100mm试管中,加5%α-萘酚乙醇溶液0.6ml,40%氢氧化钾溶液0.2ml和少许肌酸结晶,振摇试管后静置2h,如出现伊红色,为VP试验阳性。

将 MR-VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5滴甲基红溶液。如培养物变红色,为甲基红试验阳性,若变黄色则为阴性反应。

7.4.3 Korser氏枸掾酸盐肉汤:于36±1℃的培养96h记录有无生长。 7.4.4 LST肉汤:于36±1℃的培养48±2h,观察试管中是否产气。

7.4.5 革兰氏染色:取18h营养琼脂斜面培养物作革兰氏染色。大肠杆菌为革兰氏阴性。 7.4.6 大肠杆菌与非大肠杆菌生化鉴别如下

如出现上表以外的生化反应类型,表明培养物可能不纯,应重新划线分离,必要时做重复试验。

7.5 结果报告:大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌,发酵乳糖产酸产气,IMViC试验为++--或-+--,再根据LST肉汤阳性管数查MPN表,报告每克(毫升)样品中大肠杆菌MPN值。 注:本文参照SN0169-92《出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》

(六)沙门氏菌检验

1 主题内容与适用范围

本文规定了食品中沙门氏菌的检验方法。 本文适用于航空食品的检验。 2 设备和材料

吸管(1ml、10ml)、恒温培养箱(36±1℃、42℃)、冰箱、均质器、振荡器、平皿、稀释瓶、天平、显微镜、接种棒等 3 培养基和试剂

缓冲蛋白胨水(BP)、氯化镁孔雀绿增菌液、四硫酸钠煌绿(TTB)增菌液、亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液、亚硫酸铋琼脂(BS)、DHL琼脂、HE琼脂、WS琼脂、SS琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、靛基质试剂、尿素琼脂(pH7.2)、氰化钾(KCN)培养基、氨基酸脱羧酶试验培养基、糖发酵管、ONPG培养基、半固体琼脂、丙二酸钠培养基、沙门氏菌因子血清:按26种用于初步分型;57种用于进一步分型;163种用于详细分型。 4 检验程序

沙门氏菌检验程序如下:

5 操作步骤 5.1 前增菌

取检样25g,加入225mL缓冲蛋白胨水于均质杯内。用均质器以8000~10000r/min打碎1min,于36±1℃培养4h(干蛋品培养18~24h),移取10mL,转种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液(MM)或四硫酸钠煌绿(TTB)增菌液内,于42℃培养18~24h。同时,另取10mL,转种于100mL亚硒酸盐肮氨酸(SC)增菌液内,于36±1℃培养18~24h。 5.2 分离

取增菌液1环,划线接种于一个亚硫酸铋琼脂平板和一个DHL琼脂平板。两种增菌液可同时划线接种在同一个平板上。于36±1℃分别培养18~24h(DHL)或40~48h(BS),观察各

个平板上生长的菌落,沙门氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和沙门氏菌Ⅲ在各个平板上的菌落特征见表1。

表1 沙门氏菌属各群在各种选择性琼脂平板上的菌落特征

5.3 生化试验

5.3.1 自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落,分别接种三糖铁琼脂。在三糖铁琼脂内,肠杆菌科常见属种的反应结果见表2。 表2 肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果

说明:在三糖铁琼脂内只有斜面产酸并同时硫化氢(H2S)阴性的菌株可以排除,其他的反应结果均有沙门氏菌的可能,同时也均有不是沙门氏菌的可能。

5.3.2 在接种三糖铁琼脂的同时,再接种蛋白陈水(供做靛基质试验)、尿素琼脂(pH7.2)、氰化钾(KCN)培养基和赖氨酸脱竣酶试验培养基及对照培养基各1管,于36±1℃培养18~24h,

必要时可延长至48h,按表3判定结果。按反应序号分类,沙门氏菌属的结果应属于A1、A2和B1,其他5种反应结果均可以排除。 表3 肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表

5.3.3 反应序号A1:典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氨酸3项中有1项异常,按表4可判定为沙门氏菌。如有2项异常,则按A3判定为弗劳地氏柠檬酸杆菌。 表4 5.3.4 反应序号A2:补做甘露醇和山梨醇试验,按表5判定结果。

表5 5.3.5 反应序号B1:补做ONPG。ONPG十为大肠埃希氏菌,ONPG-为沙门氏菌。同时,沙门氏菌应为赖氨酸+,但甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸-。 5.3.6 必要时按表6进行沙门氏菌生化群的鉴别。

表6沙门氏菌属各生化群的鉴别

5.4 血清学分型鉴定

具体内容见GB/T4789.4-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》中6.4。 5.5 菌型的判定和结果报告

综合以上生化试验和血清学分型鉴定的结果,按照GB/T4789.4-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》中表8或有关沙门氏菌属抗原表判定菌型,并报告结果。

注:本文参照GB/T4789.4-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》

(七)金黄色葡萄球菌检验

1 主题内容与适用范围

本文规定了食品中金黄色葡萄球菌的检验方法。 本文适用于航空食品的检验。 2 设备和材料

吸管(1ml、10ml)、恒温培养箱(36±1℃)、冰箱、均质器、振荡器、平皿、稀释瓶、天平、显微镜、接种棒等 3 培养基和试剂

普通肉汤培养基、胰蛋白胨大豆肉汤、Baird-Prker琼脂平板、缓冲蛋白胨水(BP)、凝固酶试验冻干血浆

4 检验程序(非选择性增菌法) 金黄色葡萄球菌检验程序如下:

5 操作步骤

5.1 称取25g固体样品;吸取25mL液体样品,加入225mLBP胨水,固体样品研磨或置均质器中制成混悬液。

5.2 吸取10mL上述混悬液,接种于10mL双料胰蛋白胨大豆肉汤中,置36±1℃培养2h。 5.3 再加入20ml 含20%NaCl的单料胰蛋白胨大豆肉汤,置36±1℃培养24±2h。 5.4 划线转种2个表面干燥的Baird-Parker琼脂平板上,36±1℃培养46±2h。 5.5 挑取可疑菌落移种到肉汤培养基中,置36±1℃温箱培养24h。

5.6 取肉汤培养物0.3ml同0.5ml凝固酶试验冻干血浆于8mm*100mm试管内充分混合,置36±1℃培养,定时观察是否有凝块形成,至少观察6h,以内容物完全凝固,使试管倒置或倾斜时不流动为阳性。试验中需同时做已知阳性和阴性对照。对可疑结果,应进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试验。

5.7 本菌为革兰氏阳性球菌,排列是葡萄球状,无芽胞,无荚膜,致病性葡萄球菌菌体较小,直径约为0.5~1μm。在Baird-Parker平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为2~3mm,颜色呈灰色到黑色,边缘为淡色,周围为一混浊带,在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度,偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落;但无混浊带及透明圈。 5.8 报告结果

如发现有凝固酶试验阳性的菌落,即报告1g(ml)食品中有金黄色葡萄球菌存在,否则为阴性。

注:本文参照SN0172-92《出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法》

(八)霉菌计数

1 主题内容与适用范围

本文规定了食品和饮料霉菌计数的检验方法。 本文适用于航空食品和饮料中霉菌计数的检验。 2 设备和材料

温箱(25~28℃)、振荡器、天平、玻塞三角瓶(500mL)、平皿(直径9cm)、吸管(1mL及10mL)、酒精灯等。 3 培养基和试剂

高盐察氏培养基、灭菌蒸馏水、乙醇 4 操作步骤

4.1 无菌操作称取检样25g(或25mL),放人含有225mL灭菌水的玻塞三角瓶中,振摇30min,即为1:10稀释液。

4.2 用灭菌吸管吸取1∶10稀释液10mL,注入试管中,另用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50次,使霉菌孢子充分散开。

4.3 取1mL1∶10稀释液注入含有9mL灭菌水的试管中,另换一支1mL灭菌吸管吹吸5次,此液为1∶100稀释液。

4.4 按上述操作顺序做10倍递增稀释液,每稀释一次,换用一支1mL灭菌吸管,根据对样品污染情况的估计,选择3个合适的稀释度,分别在做10倍稀释的同时,吸取1mL稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做2个平皿,然后将凉至45℃左右的培养基注入平皿中,待琼脂凝固后,倒置于25~28℃温箱中,3d后开始观察,共培养观察5d。

4.5 计算方法:通常选择菌落数在10~150之间的平皿进行计数,同稀释度的2个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数,即为每克(或毫升)检样中所含霉菌数。 4.6 报告:每克(或毫升)食品所含霉菌以个/g(个/mL)表示。

注:本文参照GB/T4789.15-2003《食品微生物学检验霉菌和酵母计数》

(九)革兰氏染色

1 原理

革兰氏染色法是细菌学中重要的鉴别染色法,通过此法染色,可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌和阴性菌两大类。其过程是:草酸铵结晶紫初染→路哥尔氏碘液媒染→95%乙醇脱色→蕃红花红复染。若细胞能保持结晶紫与碘所形成的复合物而不被乙醇脱色,则细菌呈紫色,称革兰氏阳性菌,若被乙醇脱色而被蕃红复染成红色,则称革兰氏阴性菌, 2 药品与材料

革兰氏染色液(草酸铵结晶紫液+路哥尔氏碘液+95%乙醇+蕃红花红)、蒸馏水、菌落培养物(培养18~24小时)、二甲苯、香柏油 3 器具及其它

载玻片、盖玻片、酒精灯、废液缸、洗瓶、吸水纸、接种环、显微镜、镊子 4 操作程序

涂片→干燥→固定→草酸铵结晶紫初染→水洗→碘液媒染→95%酒精脱色20~30秒→水洗→蕃红花红液复染→水洗干燥→镜检

4.1 涂片:先滴一小滴蒸馏水于载玻片中央,然后用接种环取少量菌体轻轻混入水中,涂成一薄层并使细胞均匀分散。

4.2 干燥:在空气中令其自然干燥或在酒精灯火焰上端高处微微加温但勿靠近火焰。 4.3 固定:把涂有细菌的面朝上,在酒精灯火焰上通过三次,目的是杀死菌体细胞以及改变对染色剂的通透性,同时使涂片的菌体紧贴载玻片而不易被水冲洗脱落。 4.4 初染:用草酸铵结晶紫液初染1分钟,水洗、吸干。

4.5 媒染:加一滴路哥尔氏碘液媒染1分钟、水洗。(此时结晶紫与碘液成复合物) 4.6 脱色:斜置载玻片,用95%酒精冲洗约20~30秒种,立即水洗,吸干。 4.7 复染:用蕃红花红液复染1~2分种,水洗晾干或用吸水纸吸干。

4.8 镜检:在显微镜油浸镜下检查革兰氏阳性菌和阴性菌染色的差异,并观察菌体形态。

5 革兰氏染色成败的控制点

5.1 涂片厚度:涂片过厚,细胞重叠,无法较好地观察单个细菌细胞形态,涂片过薄,细胞数量少,不利于观察;

5.2 染色时间。染色时间过长,结晶紫与细胞结合,脱色不易,染色不够,结晶紫尚未与细胞结合。染色控制不好,易引起误判;

5.3 乙醇脱色的程度。如脱色过度,则阳性菌被误染为阴性菌;若脱色不够,则阴性菌被误染为阳性菌。

(十)空气中微生物的检验

1 目的

了解空气中微生物的状况,掌握空气中微生物的检验方法,分析引起食品中微生物的来源因素,及时控制餐食卫生质量。 2 原理

根据空气中微生物一般吸附在尘埃中,由于地心引力尘埃下沉到地面或物体表面原理制定的。 3 器材

培养皿、生化培养箱、营养琼脂 4 方法(沉降法)

4.1 以无菌操作将已融化并冷却至50℃的营养琼脂倒入培养皿中,放置凝固。

4.2 在不同地点将培养皿分别打开,在空气中暴露15分钟,立即将培养皿盖好,作上记号,并作一空白对照。

4.3 将培养皿放置37℃恒温培养48小时,取出观察其结果并计算出菌落数。 4.4 计算公式:每立方米空气中细菌数=50000N/(A×t)

N:为培养皿经培养后的菌落数

A:为所用平皿面积(cm2),平皿直径(ø)9cm t:为平皿暴露于空气中的时间(t=15分钟)

(这个公式根据:根据15分钟内在100 cm2面积上降落的细菌数约等于10升空气中的含菌数而估计的。)

注:本文参照GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录E

(十一) 水中微生物的检验

1 基本原理

细菌总数是指水样在一定条件下培养后所得1ml水样所含菌落的总数。

总大肠菌群系指一群在37℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便,具有指示菌的一般特征,故以此作为粪便污染指标评价饮水的卫生质量。水中总大肠菌群数系以100ml水样中污染的总大肠菌群最可能数(MPN)表示。

按国家饮用水卫生标准规定,1毫升自来水中杂菌数不得超过100个,大肠菌群数1000毫升水中不得超过3个才算合格。 2 材料

营养琼脂、乳糖胆盐发酵培养基、酒精、棉签、培养皿、无菌广口瓶 3 方法

3.1 采样(自来水):先将水龙头打开,放水1~2分钟后,关闭水龙头。用酒精棉球灼烧龙头三分钟灭菌,再开放水龙头使水流5分钟,用无菌瓶收集水样。 3.2 细菌总数检查:

3.2.1 用灭菌吸管吸取1ml水样,注入灭菌培养皿中,共做2个。

3.2.2 分别倾注约15ml已熔化冷却至45℃左右的营养琼脂,混匀后置37℃培养24小时进行菌落计数,同时应作一空白对照。两个培养皿的平均菌落数即为水样1ml中的细菌总数。 3.3 大肠菌群数检查:

乳糖发酵试验→分离培养→证实试验→报告

3.3.1 乳糖发酵试验:

自来水的接种方法:在2个装有50ml三倍料乳糖胆盐发酵液的三角瓶中,各加入100ml水样;在10支装有5ml同样发酵的试管中,各加入10ml水样,混匀。将上述各发酵管(瓶)置36±1℃温箱内,培养24±2小时,观察结果。如所有发酵管都不产气,则可报告为大肠

菌群阴性;如有产气者,则按下列程序进行。

3.3.2 分离培养:将产气的发酵管用接种环分别以划线法转接于伊红美兰琼脂平板上,置36±1℃温箱内,培养18~24小时,取出观察菌落形态。

3.3.3 证实试验:在每个平板上,挑取可疑菌落(紫黑色或淡紫红色,有或略有或没有金属光泽的菌落)1~2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36±1℃培养24±2小时进行复发酵试验,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的芽孢杆菌即可报告为大肠菌群阳性。 4 报告

每毫升自来水所含菌落数以个/mL表示;根据证实为大肠菌群阳性的管数,查大肠菌群检索表,报告每升水样的大肠菌群的最可能数。

注:本文参照GB5750-85《生活饮用水标准检验方法》

(十二)食品接触面的微生物检验

1 原理

食品接触面分为人员手、设备、器具等食品直接接触,其表面存在有微生物,为更好控制微生物生长繁殖,以大肠菌群为主要检测指标,检测结果应基本呈阴性(其中人员手需做菌落总数检测)。

2 检验材料

乳糖胆盐发酵培养基、EMB、乳糖复发酵培养基、大肠菌群检测纸片、无菌棉球、无菌水、酒精棉球、酒精灯、镊子

3 检验方法

3.1 人员手检验(发酵法)

3.1.1 样品采集

被检人双手五指并拢,用一浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面,从指尖到指端来回涂擦10次,然后剪去手接触部分棉棒,将棉签放入含10ml灭菌生理盐水的采样管内。

3.1.2 细菌菌落总数的检测

将已采集的样品在6h内送实验室,每支采样管充分混匀后取1ml样液,放入灭菌平皿内,倾注营养琼脂培养基,每个样品平行接种两块平皿,置36±1℃培养48小时,计数平板上细菌菌落数。

Y=A*10(Y为工人手表面细菌菌落总数,cfu/只手;A为平板上平均细菌菌落数)

3.1.3 大肠菌群的检测

每支采样管充分混匀后取1ml样液,分别放入10ml乳糖胆盐发酵管中,每个样品平行接种3管,置36±1℃培养24小时。如所有发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性;如有产气者,则按下列程序进行。

3.1.4 分离培养:将产气的发酵管用接种环分别以划线法转接于伊红美兰琼脂平板上,置36±1℃温箱内,培养18~24小时,取出观察菌落形态。

3.1.5 证实试验:在每个平板上,挑取可疑菌落(紫黑色或淡紫红色,有或略有或没有金属光泽的菌落)1~2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36±1℃培养24±2小时进行复发酵试验,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的芽孢杆菌即可报告为大肠菌群阳性。

3.2 设备、器具等的检验(纸片法)

3.2.1 将面积为25cm2的大肠菌群检测纸片用无菌水浸湿后立即贴于被检物表面,每份检样贴2张,30s后取下,置于无菌塑料袋中。

3.2.2 将已采样的纸片置37℃培养16-18小时,观察纸片颜色变化情况。

3.2.3 若纸片保持蓝紫色不变为大肠菌群阴性,纸片变黄并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕为阳性。

4 报告

人员手菌落总数为cfu/只手,大肠菌群为未检出或检出;设备、器具等大肠菌群为未检出或检出。

注:本文参照GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录E

GB14934—94《食(饮)具消毒卫生标准》

(十三)蔬菜农残的快速检测

1 原理

农残速测卡是用对农药高度敏感的胆碱酯酶和显色剂做成的酶试纸,可以快速检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯这两类用量较大、毒性较高的杀虫剂的残留情况,选用的酶对甲胺磷敏感,抗干扰性强,操作简便。该方法已经国家标准委员会通过,定为国家标准方法GB/T5009.199-2003。

农残速测卡对几种常用农药的最低检测限(单位:mg/kg)如下:

甲胺磷1.7 马拉硫磷2.0 水胺硫磷3.1 对硫磷1.7

久拉磷2.5 乙酰甲胺磷3.5 敌敌畏0.3 乐果1.3

敌百虫0.3 呋喃丹0.5 西维园2.5 好年冬1.0

2 检验材料

农残速测卡

3 使用方法

3.1 整体测定法

3.1.1 选取有代表性的蔬菜样品,擦去表面泥土,剪成1cm左右见方碎片,取5g放入带盖瓶中,加入10ml纯净水或缓冲溶液,振摇50次,静置2min以上。

3.1.2 取一片速测卡,用白色药片沾取提取液,放置10min以上进行预反应,有条件时在37℃恒温装置中放置10min。预反应后的药片表面必须保持湿润。

3.1.3 将速测卡对折,用手捏3min或用恒温装置恒温3min,使红色药片与白色药片叠合发生反应。

3.1.4 每批测定应设一个纯净水或缓冲液的空白对照卡。

3.2 表面测定法(粗筛法)

3.2.1 擦去蔬菜表面泥土,滴2-3滴洗脱液在蔬菜表面,用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。

3.2.2 取一片速测卡,将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。

3.2.3 放置10min以上进行预反应,有条件时在37℃恒温装置中放置10min。预反应后的药片表面必须保持湿润。

3.2.4 将速测卡对折,用手捏3min或用恒温装置恒温3min,使红色药片与白色药片叠合发生反应。

3.2.5 每批测定应设一个纯净水或缓冲液的空白对照卡。

4 结果判定

与空白对照卡比较,白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果,不变蓝为强阳性结果,说明农药残留量较高,显浅蓝色为弱阳性结果,说明农药残留量相对较低。白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同,为阴性结果。对阳性结果的样品,可用其它分析方法进一步确定具体农药品种和含量。

5 附加说明

5.1 葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、皎白、蘑菇及番茄汁液中,含有对酶有影响的植物次生物质,容易产生假阳性。处理这类样品时,可采取整株(体)蔬菜浸提或采用表面测定法。对一些含叶绿素较高的蔬菜,也可采取整株(体)蔬菜浸提的方法,减少色素的干扰。

5.2 当温度条件低于37℃,酶反应的速度随之放慢,药片加液后放置反应的时间应相对延长,延长时间的确定,应以空白对照卡用(体温)手指捏3分钟时可以变蓝,即可往下操作。注意样品放置的时间应与空白对照卡放置的时间一致才有可比性。空白对照卡不变色的原因:一是药片表面缓冲溶液加的少、预反应后的药片表面不够湿润,二是温度太低。

5.3 速测卡对农药非常敏感,测定时如果附近喷洒农药或使用卫生杀虫剂,以及操作者和器皿沾有微量农药,都会造成对照和测定药片不变蓝。

5.4 红色药片与白色药片叠合反应的时间以3min为准,3min后蓝色会逐渐加深,24h后颜色会逐渐退去。

初中生物实验操作试卷

(一) 制作和观察洋葱表皮细胞的临时装片(p43)

实验用品:洋葱,稀碘液,清水,吸管,镊子,载玻片,盖玻片,吸水纸,纱布,刀片、

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显微镜

(二) 徒手切片和观察叶片的结构(p113)

实验用品:新鲜叶片,清水,双面刀片(两个,并排在一起,一侧用胶布粘牢),载玻片,盖玻片,培养皿,滴管,吸水纸,纱布,毛笔,显微镜

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实验三:观察植物叶表皮的气孔

1.取一蚕豆叶片,把叶片的背面向里折叠,然后从折断处轻轻撕拉。 2.在折断处找到白色薄膜,这就是叶的下表皮。 3.用镊子夹取一小片下表皮,放在载玻片的水滴中。 4.用解剖针把它展平,盖上盖玻片,制成临时装片。 5.将制好的临时装片放在低倍显微镜下观察。 6.看到许多形状不规则的表皮细胞。

7.还看到成对的半月形保卫细胞,以及由保卫细胞间隙所形成的气孔。 8.画5-6个相连的蚕豆叶表皮细胞。 9.画一个由两个保卫细胞围成的气孔。 10.注明各部分的名称。

一、光学显微镜的使用步骤:

材料用具:显微镜、擦镜纸、纱布、载玻片、盖玻片 1、 取拿与安放

① 右手握住镜臂,左手托住镜座。

② 把显微镜轻轻放在实验台略偏左的地方(操作者),镜臂朝向自己,镜座距试验台边缘7厘米左右。

③ 安装好目镜和物镜。 认识显微镜的构造

- 3 -

①认识显微镜各部分的名称和作用②观察目镜和物镜的特点③分别转动粗、细准焦螺旋看镜筒位置的变化④看反光镜两面的区别⑤观察遮光器上面光圈的大小 显微镜的使用 2、 对光

① 转动组准焦螺旋,使镜筒上升。②转动转换器,使低倍物镜对准通光孔。注意,物镜的前端与载物台要保持2厘米的距离。 ③ 转动遮光器,把一个较大的光圈对准通光孔。④左眼注视目镜内(右眼睁开,便于以后观察画图),转动反光镜,看到明亮视野(不能用直射阳光作为光源)。

3、把所要观察的载玻片放到载物台上,用压片夹压住,标本要正对通光孔中央。 4、观察

① 从侧面注视物镜,转动粗准焦螺旋,使镜筒缓缓下降,直到物镜接近载玻片2毫米处(眼睛看着物镜以免物镜碰到玻片标本)。

②左眼向目镜内看,同时反向转动粗准焦螺旋,使镜筒缓缓上升,直到找到物像为止。再略微转动细准焦螺旋,使看到的物像更加清晰。 ③ 缓缓移动装片,注意物像的移动方向。 5、整理和存放

①实验结束,先提升镜筒,取下装片。②用纱布将显微镜外表擦拭干净,用擦镜纸擦镜头。③转动转换器,使物镜、偏到两旁,镜筒降到最低,反光镜树立。④放回镜箱,放到原处。

二、用显微镜观察叶片的结构

材料用具:新鲜的植物叶片、清水、双面刀片、镊子、毛笔、培养皿、滴管、纱布、载玻片、盖玻片、显微镜等 方法步骤:

1、用镊子取叶片,放到载玻片上。

2、捏紧并排的两个刀片,迅速切割叶片。 3、将切下的薄片放到培养皿的清水中。

4、用毛笔蘸取最薄的一片,将切面展放在滴有清水的载玻片上,盖上盖玻片,用吸水纸吸去多余水分,制成临时切片。

5、将临时切片放到显微镜上进行观察叶片各部分结构。

6、用镊子从新鲜叶片分别撕取上、下表皮,制成临时装片,观察保卫细胞和气孔。

五、用显微镜观察植物细胞

材料用具:显微镜、稀碘液、清水、镊子、解剖针、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、盖玻片。 步骤:

1、擦2、滴:清水,维持细胞的正常形态3、撕:把洋葱鳞片叶向外折断,用 镊子在内表面撕取一块薄膜。4、展:用解剖针把薄膜展平(防止细胞重叠,影响观察)5、盖:防止产生气泡6、染:2-3次,侵润全部、

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中考生物实验操作

中考生物实验操作

一、认识显微镜的结构

目的要求:1,认识显微镜的结构

2,按正确的操作步骤练习使用显微镜

方法步骤:1,打开镜箱,右手握住镜臂,左手托住镜座,从镜箱中取出显微镜,小心地置于实验桌偏左侧,依次辨认各部分结构名称

(1)支持部分:镜座,镜柱,镜臂、载物台,镜筒,转换器

(2)光学部分:遮光器、反光镜、物镜,目镜

(3)调节部分:粗准焦螺旋,细准焦螺旋

2,按下列操作要领进行显微镜操作:

(1)安放(同1)。

(2)对光

①转动转换器,

使低倍物镜正对通光孔。

②转动粗准焦螺旋,使物镜与载物台距离约2厘米。

③转动遮光器,让一个较大的光圈对准通光孔,让反光镜朝向光源。

④用左眼向目镜里注视,可见一个明亮的圆形视野。

(3)观察

①低倍观察:

把装片或切片放在载物台上,使标本正对通光孔,用压片夹压住。两眼注视着物镜,慢慢地转动粗准焦螺旋;使镜筒下降直到物镜接近装片为止。用左眼向目镜里注视(右眼也要睁开),同时反方向转动粗准焦螺旋,使镜筒徐徐上升,直到看清物象为止。转动细准焦螺旋调至物象清晰,调节光圈至视野亮度适宜。

②高倍观察: 移动装片或切片,把选好欲再放大的部分(目标)移到视野正中央, 转动转换器,让高信物镜对准通光孔;调节细准焦螺旋至物象清晰.

备注说明: 1、使用显微镜应注意保护好镜头,不要用手抚摸透镜,载物台应保持清洁,不要随意转动准焦螺旋和转换器。

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2,观察完毕,小心移出装片,转动换转器将物镜偏至两侧,使镜筒垂直下降,小心放入镜箱中固定好,以备下次实验用。

二、洋葱表皮细胞临时装片的制作

目的要求

1、初步训练制作临时装片及简单的染色方法

2,初步学会画细胞简图

材料用具:显微镜,刀子、镊子,载玻片、盖玻皮、碘液,吸水纸,滴管,纱布,洋葱头 方法步骤

1、制作临时装片

①把载玻片、盖玻片用纱布擦干净。

②用滴管在载玻片中央滴一滴清水。

③用刀片在洋葱鳞片叶的内表面划一个小方块。

④用镊子撕下这方表皮,平展在载玻片的水滴中。

⑤用镊子夹起盖玻片,一侧先接触载玻片后轻放平,以免产生气泡。

2、显微镜下低倍观察,辨认出细胞的主要组成结构

3、染色观察

①在盖玻片的一侧滴加碘液,另一侧用吸水纸吸水,使染色液浸入标本之中②置于显微镜下观察。

4、绘出细胞简图,注明结构名称。

实验现象

1、观察可见,洋葱表皮细胞排列整齐,每个细胞都有明显的细胞壁、细胞质、细胞核和液泡

2、染色后观察可见,液泡,细胞核等结构更加清楚。

结果分析

植物细胞是由细胞壁、细胞膜(紧贴在细胞壁上不易辨认),细胞质内有大的液泡)和细胞核组成的。

三、种子成分的测定

目的要求

1,初步学会验证种子成分的实验方法

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2,明确种子的主要成分是水分、无机盐、淀粉、蛋白质和脂肪

材料用具 面粉、小麦粒、试管、酒精灯、试管夹,药匙、纱布、玻璃杯(或大烧杯),碘液、纸、火柴、解剖针、量筒

方法步骤

1、取数十粒干燥的小麦放在干燥的试管中,用试管夹夹住离试管口1/3的地方,置于酒精灯的外焰上加热,观察试管壁上有什么现象,发生。

2、用解剖针把一粒小麦种子串起来,放在酒精灯外焰上燃烧,观察种子颜色变化,直到燃烧尽为止。

3、取面粉一匙,加水和成面团,用纱布包好后置寸:玻璃杯内的清水中揉洗,观察清水有何变化;取洗液5毫升(用量筒)放入试管中加热煮成糊状,冷却后加几滴碘酒,观察颜色有何变化

4,继续揉挤面团,直到面团基本上消失,观察纱布内的物质有何颜色,特点。

5,取小麦籽粒用火烘烤干后,切下胚,放在纸上挤压,纸上有何现象出现。

实验现象

1,试管内壁出现许多小水珠。

2、种子先变成黑色的碳,碳继续燃烧尽后剩余少量灰分。

3、清水变成乳白色液体,加碘变蓝色。

4、纱布内有淡黄色的具有粘性和延展性的物质(俗称“面筋”)。

5,纸上出现透明的油迹。

结果分析

实验1—5依次说明了种子含有的主要成分是,水分、无机盐、淀粉、蛋白质和脂肪。 备注说明

1,用酒精灯加热灯管时,注意均匀加热,防止试管破裂,试管口略向上倾斜。

2,可用花生种子(含脂肪成分多)代替小麦粒,放在纸上直接按压,纸上油迹大而透明。

四、制作并观察人的口腔上皮细胞装片,画细胞结构图

目的要求

1、学会制作人的口腔上皮细胞装片和绘画方法。

2、认识人体细胞的基本结构。

材料用具 显微镜、载玻片、盖玻片,滴管、镊子,吸水纸、牙签,0.9%生理盐水、碘液、

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0.1一0.5%高锰酸钾溶液,清水,口杯

方法步骤

1、制作临时装片

①、在洁净的载玻片中央滴一滴o.9%的生理盐水。

②用清水漱口,除口中的杂物。

③取一根用0.1一0.5%的高锰酸钾溶液浸过的牙签,在口腔内颊部(内壁)上轻轻刮取少许口腔粘膜的碎屑,涂在载玻片的生理盐水中。

④盖上盖玻片(注意方法,防止产生气泡)。

⑤在盖玻片一侧滴加碘液,另一侧用吸水纸吸引,使其着色。

2,观察和绘图

①将装片置于低倍镜下观察,注意细胞的形态。选择一个较清楚的细胞移到视野中央, 换上高倍镜观察,注意细胞的组成结构。

②绘图,根据视野中的某个清晰的细胞,绘出细胞结构图,并注明各部分名称。 实验现象

低倍镜下可见:口腔上皮细胞扁平,多角形且不规则,三五成群或单个分散,或若干重叠。

高倍镜下可见:圆形的细胞核位于中央着色较深,核周围染色较浅的是细胞质,细胞膜较薄,包在细胞质外,不易看清。

结果分析

人体细胞是由细胞膜、细胞质和细胞核三部分组成的。口腔粘膜属于复层扁平上皮,具有保护和防止病菌侵入的作用。

备注说明

1、如果视野中出现了许多纤维状或其它异形物,说明漱口不彻底干净。

2、0.1一0.5%。高锰酸钾溶液的作用是将牙签消毒。

3、光线调暗一些,细胞各组成部分较清楚。

五、鉴定骨的成分

目的要求学会鉴定骨的成分的实验方法,理解骨成分与功能相适应的特点

材料用具

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硬骨色的肋骨(或其它小动物的长骨),试管、镊子;酒精灯,火柴, 15—20%盐酸,试管架, 清水

方法步骤

1、鉴定骨中有机物

①取一根鱼的肋骨,投入盛有15—20%盐酸的试管中,观察有何现象发生。

②约过20分钟后取出,清水冲洗干净,将骨弯曲一下,有何感觉。

2、鉴定骨中无机物

①取一根鱼的肋骨,用镊子夹住,放在酒精灯外焰上煅烧,注意颜色变化。

②待到骨变灰白时,移熄酒精,放在纸上,轻轻敲打一下,有何现象。

实验现象

1、试管中有小气泡不断上升,骨变柔软可以打结。

2、开始煅烧骨逐渐发黑,后来逐渐变灰白色。;

结果分析

骨是由柔韧的有机物和脆硬的无机物组成,这两种成分使骨既坚硬又有一定的弹性。 备注说明

1、骨煅烧应该放在酒精灯的外焰上。

2,有条件的学校可用天平测一下肋骨重量,再将灰分无机物和柔韧有机物分别称量一下,计算一下骨中有机物和无机物的含量。

六、用显微镜观察人血永久装片

目的要求学会用显微镜观察血涂片的实验方法,认识红细胞和白细胞

材料用具

人血永久装片

显微镜

方法步骤

1、观察:低倍镜下观察人血永久装片,注意红细胞、白细胞的形状、颜色、数量多少,对照观察永久血涂片分辨白细胞的主要结构。

实验现象 光镜下可见数量多、双面凹陷圆盘状呈红色的红细胞,而数量少,形体比红细胞大、无色透明的是白细胞,在永久涂片的观察视野中,可见红细胞无核,而白细胞有明显的不规则的细胞核。

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2、结果分析

红细胞内含有一种红色含铁的蛋白质(血红蛋白),使得细胞呈红色,数量众多,双面凹陷增大了与氧气的接触面,与运氧功能相适应。白细胞通过变形运动吞噬病菌,对机体有保护作用。

备注说明 1、永久血涂片经染色处理,除可见白细胞核外,在低倍镜注意观察也可见着色成蓝色的不规则小体,经常成堆分布在细胞之间,这就是血小板。

2,实验完后,要用清水及时将玻片血膜冲洗干净。

七、观察小鱼尾鳍(或蛙蹼或肠系膜)内的血液流动

目的要求

1,初步学会观察实验操作方法

2、观察血液在血管中流动情况,识别动脉,静脉和毛细血管

材料用具活小鱼(或蛙),显微镜,培养皿(或玻璃板)、滴管、脱脂棉

方法步骤

1、固定小鱼:用浸湿清水的脱脂棉块轻轻地将小鱼的头部和躯干部包裹住,只露尾部,放入培养皿(或玻璃板)中,用手轻轻地把尾鳍展开。

2、观察:将培养皿(或玻璃板)置于载物台上,尾鳍对准通光孔,低倍镜下观察,注意血流方向,区分动脉、静脉和毛细血管。

实验现象

低倍镜下可见:血管纵横交错,血细胞在血管中不停地流动着。其中血流速度慢, 血细胞只有—行通过的是最细的毛细血管;血流速度较快,血液流向分枝,较粗的血管是动脉;血流速度较慢,血流由分枝汇流且较粗的血管是静脉。 结果分析

人体生活细胞所必需的氧气和养料是由动脉中的血液输送到毛细血管后,才能获得, 而代谢废物,CO2则由静脉回流,最后排泄而出,三种类型的血管的结构特点都是与功能相适应的。

备注说明

观察蛙蹼:取一只活蛙,用探针破坏脑和脊髓,仰放在一块带圆孔的薄木板上,用线绑好。 把后肢蹼膜展开,用大头针固定,低倍镜下观察即可。

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八、观察唾液淀粉酶对淀粉的消化作用

目的要求学会实验操作方法,了解唾液中的淀粉酶具有消化作用

材料用具淀粉、烧杯、量筒、试管、酒精灯、试管架、三角架,石棉网,

温度计、滴管、碘液、清水、火柴,唾液、口杯、蒸馏水

方法步骤

1、制备唾液,用清水漱口后,用一小烧杯靠在下唇边缘,将舌尖舔

上颌或下颌门齿基部,使口稍张开,不久便有唾液流入杯内。

2、制备淀粉糊:取淀粉1克加水毫升,煮沸后冷却备用。

3、混匀保温:取1号,2号(事先编号)两支试管,各加入2毫升淀粉糊,

1号管加入2毫升唾液,向2号管加入2毫升蒸馏水(或清水),摇匀后置于37℃左右的水中, 随时加热保持温度

4、15分钟以后取出,向两试管各滴2滴碘液,注意观察颜色变化。

实验现象

1号试管颜色无变化,

2号试管变蓝色。

结果分析

1号试管中的唾液里含有唾液淀粉酶,使淀粉分解,遇碘不变蓝色。

2号试管中的蒸馏水无酶,不能使淀粉分解,淀粉遇碘变蓝色。实验证明了唾液中含有唾液淀粉酶,能使淀粉发生分解。

备注说明

有条件的学校,可另取两支试管(编号为3号和4号),各加入2毫升唾液,问3号管加入2%。盐酸(2—3滴),向4号管加入2毫升煮沸的唾液,重复上述方法步骤(3、4),发现两管均变蓝色,以此证明酶的催化活性受温度和酸碱度的影响。

十、验证人体呼出的气体中含有较多的二氧化碳

目的要求 学会实验方法,证明人体呼出的气体中含有较多的二氧化碳

材料用具澄清的石灰水,锥形瓶(2个)、烧杯、胶皮管、玻璃管、橡胶塞等

方法步骤

1、连接好装置,假如等量的石灰水。

2,通过细长玻璃管从甲装置吸气向乙装置内的石灰水吹气。

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3,观察液体的变化情况。

实验现象乙中澄清的石灰水逐渐变混浊,呈乳白色。

结果分析:二氧化碳与氢氧化钙反应生成了不溶于水的乳白色的碳酸钙沉淀,证明了人体呼出气中含有较多的二氧化碳。

备注说明1,本实验简单,时间短,效果明显,玻璃管吹完后应注意消毒。

2、沉淀产生后,不要继续向内吹入过量气体,否则过量的二氧化碳与碳酸钙发生反应生成溶于水的碳酸氢钙,使浑浊消失。

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生物实验操作步骤

生物实验操作步骤

一、安装显微镜和对光:

A、操作步骤:

1.一手握住镜臂,一手托住镜座,把显微镜轻轻地放在实验台上,镜臂靠近身体略偏左,镜座距实验台边缘约5厘米。安装好目镜和物镜。

2.转动转换器,使低倍物镜对准通光孔。转动遮光器,使最大的光圈对准通光孔。 3、左眼注视目镜内,同时双手转动反光镜(光强用使用平面镜、光弱使用凹面镜),使光线反射到镜筒里,直到整个视野呈雪白色为止。

4.整理复位:把显微镜的外表擦拭干净。取下镜头放入镜盒内,并将镜筒缓缓下降到最低处。最后把显微镜放进镜箱里,放回原处。

B、去年考卷:

C、评分标准:

(1)安装好物镜和目镜(1分)

(2)能将显微镜对好光观察(2分)

记录:雪白色或亮白色(1分) (3)整理器材(1分)

二、制作并观察洋葱鳞片叶临时玻片标本:

A、操作步骤:

1、用干净的纱布把载玻片和盖玻片擦干净。 2、用滴管在载玻片中央滴一滴清水。

3、用刀片在洋葱内表面划一个“井”字,用镊子撕下表皮,然后把它放在载玻片中央的水滴中,用解剖针轻轻地将其展平;

4、用镊子夹起盖玻片,使其一边接触载玻片上面的液滴,然后缓缓地盖在液滴上,盖片时要防止装片上出现气泡;

5、在载玻片的一侧滴一滴碘液,在另一侧用吸水纸吸引,重复几次,使染液浸润到整个标本;6、安装显微镜和对光;

7、将制作的装片安放在显微镜的载物台上,然后将镜筒缓缓下降直到物镜接近玻片;

8、用左眼注视目镜,调节粗准焦螺旋使镜筒缓缓上升,直到在视野中看到细胞图像,然后旋转细准焦螺旋,使物像更清晰;

9、移动装片,在视野中找到一个完整的细胞进行仔细观察;

10、整理复位:取下玻片标本,平移方式(防止折断盖玻片)取下盖玻片并连同载玻片一起放回原处。取下镜头放入镜盒内,将镜筒下降到最低处,然后把显微镜放进镜箱里。把其他废弃物放入垃圾桶并把实验桌抹干净。

B、去年考卷:

C、评分标准:

(1)用纱布将载玻片、盖玻片擦拭干净(1分) (2)在载玻片中央滴一滴清水(1分)

(3)用刀片切取一块洋葱鳞片叶,用镊子撕取鳞片叶的内表皮置于载玻片上清水中并用解剖针将表皮展平,盖上盖玻片(1分)

(4)将一滴碘液滴在盖玻片的一侧,用吸水纸从对侧引流使碘液扩散到整个标本(1分) (5)将制作好的临时装片放在显微镜下观察(1分)

记录:气泡(1分) 细胞核(1分) 细准焦螺旋(1分) 左上方(1分) (6)整理器材(1分)

三、制作并观察口腔上皮细胞临时玻片标本:

A 、操作步骤:

1、用干净的纱布把载玻片和盖玻片擦干净; 2、用滴管在载玻片中央滴一滴生理盐水;

3、用清水漱口,清除口腔中食物碎屑,用消毒牙签粗的一端在口腔侧壁上轻轻刮几下; 4、将牙签上附着的碎屑放在载玻片的生理盐水中涂抹几下;

5、用镊子夹起盖玻片,使其一边接触载玻片上面的液滴,然后缓缓地盖在液滴上,盖片时要防止装片上出现气泡。

6、在载玻片的一侧滴一滴碘液,在另一侧用吸水纸吸引,重复几次,使染液浸润到整个标本;

6、安装显微镜和对光;

7、将制作的装片安放在显微镜的载物台上,然后将镜筒缓缓下降直到物镜接近玻片; 8、用左眼注视目镜,调节粗准焦螺旋使镜筒缓缓上升,直到在视野中看到细胞图像,然后旋转细准焦螺旋,使物像更清晰;

9、移动装片,在视野中找到一个完整的细胞进行仔细观察。

10、整理复位:取下玻片标本,平移方式取下盖玻片并连同载玻片一起放回原处。取下镜头放入镜盒内,将镜筒下降到最低处,然后把显微镜放进镜箱里。把其他废弃物放入垃圾桶并把实验桌抹干净。

以前没考过,今年有可能考。与前一个实验相比,其实差别并不大,相信你能找到不同之处并进行练习。

四、种子中无机盐的检测。

A、操作步骤:

1、用解剖针穿上一粒玉米种子,放到酒精灯上燃烧,观察燃烧情况; 2、待燃烧停止后,小心地将针上的物质放到纸上观察和按压; 3、整理复位:将实验中产生的废物放入垃圾桶。

B、去年考卷:

C、评分标准:

(1)将一粒玉米种子穿在解剖针上(1分)

(2)完全燃烧玉米种子(1分) 观察(1分)

记录:无机盐(1分) (3)整理器材(1分)

五、食物中脂肪的检测。

A、操作步骤:

1、将花生分成两瓣,用镊子夹住其中一瓣在酒精灯上烘烤(不能烤焦烤糊); 2、将烘烤过的花生种子放在一张白纸上按压,观察纸上的变化; 3、整理复位:将实验中产生的废物放入垃圾桶。

B、去年考卷:

C、评分标准:

(1)将一粒花生分成两瓣,(1分)

用镊子夹住一瓣在酒精灯上烘烤一会儿(1分)

(2)等烘烤的花生冷却后,在白纸上用力挤压观察现象(1分)

记录:脂肪或油脂(1分) (3)整理器材(1分)

六、种子中水分的检测。

A、操作步骤:

1、取适量小麦种子于试管中;

2、用试管夹夹住试管在酒精灯上烘烤(只要管壁出现水珠就可停止加热),观察现象; 5、整理复位。

B、去年考卷:

C、评分标准:

(1)将少量小麦(或玉米)种子置于试管里(1分) (2)用试管夹夹住试管的中上部(1分)

(3)用酒精灯烘烤试管内的种子,观察现象(1分)

记录:水珠(1分) (4)整理器材(1分)

七、观察大豆种子的结构。

A、操作步骤:

1、将一粒吸足水分的大豆种子放在解剖盘上,观察种子的外形;

2、用镊子夹住大豆,在种脐的对侧用解剖刀轻轻地划一个小口,然后剥离种皮,切开胚轴连接处,掰开两片子叶。对照下图观察大豆种子的各个结构:

3.整理复位:将实验中产生的废物放入垃圾桶;

B、去年考卷:

C、评分标准:

(1)取一粒吸足水分的大豆种子放在白瓷盘上,观察种子的外形(1分)

(2)用镊子夹住豆粒,用解剖刀将种皮剥下来(0.5分)并掰开子叶观察(0.5分)

记录:胚芽(1分) 胚根(1分) (3)整理器材(1分)

八、观察玉米种子的结构。

A、操作步骤:

1、将一粒吸足水分的玉米种子放在解剖盘上,观察种子的外形;

2、用镊子夹住玉米种子,沿正中线用解剖刀纵向切开,对照下图用放大镜观察玉米种子纵剖面,识别胚乳等结构;

3、将一滴碘液滴在玉米种子的纵剖面上,观察颜色的变化;

4、整理复位:将实验中产生的废物放入垃圾桶中,仪器则放回原位。

B、去年考卷:

C、评分标准:

(1)取一粒玉米种子放在白瓷盘上,观察其外形(1分)

(2)用镊子夹住玉米种子,沿正中线用解剖刀纵向切开(1分) (3)在玉米种子的切面上滴一滴碘液并观察(1分)

记录:胚乳(1分) (4)整理器材(1分)

九、蛋白质的检测。

A、操作步骤:

1、取两支试管,一支取3ml蛋清稀释液,另一支取等量的清水;

2、向其中一支试管中加入几滴双缩脲试剂A,振荡,再加入几滴双缩脲试剂B,振荡。观察试管中溶液颜色的变化;(提示:A、B液不要加反了哟!)

3、向另一支试管中加入几滴双缩脲试剂A,振荡,再加入几滴双缩脲试剂B,振荡。观察试管中溶液颜色的变化;

4、整理复位:将废液倒入前台废液桶中,清洗试管,仪器和试剂放回原处。 B、预测考卷:

C、评分标准:

(1)用2只试管分别取3毫升鸡蛋清和3毫升清水(1分)

(2)向一只试管中先滴入几滴双缩尿试剂A并震荡,然后滴入几滴双缩尿试剂B并震荡观察实验现象(1分)

(3)向另一只试管先滴入几滴双缩尿试剂A并震荡,然后滴入几滴双缩尿试剂B并震荡观察实验现象(1分)

记录:紫色反应(1分) (4)整理器材(1分)

微生物实验操作基本要求

食品卫生微生物检验实验室操作要求 核心提示: 食品微生物实验室工作人员,必须有严格的无菌观念,许多试验要求在无菌条件下进行,主要原因:一是防止试验操作中人为污染样品,二是保证工作人员安全,防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。 一、无菌操作要求

1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。

2. 进行接种食品样品时,必须穿专用的工作服、帽及拖鞋,应放在无菌室缓冲间,工作前经紫外线消毒后使用。

3. 接种食品样品时,应在进无菌室前用肥皂洗手,然后用75%酒精棉球将手擦干净。

4. 进行接种所用的吸管,平皿及培养基等必须经消毒灭菌,打开包装未使用完的器皿,不能放置后再使用,金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。

5. 从包装中取出吸管时,吸管尖部不能触及外露部位,使用吸管接种于试管或平皿时,吸管尖不得触及试管或平皿边。

6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作,接种细菌或样品时,吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。

7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝,必要时还要烧到环和针与杆的连接处,接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min,再经火焰烧灼。

8. 吸管吸取菌液或样品时,应用相应的橡皮头吸取,不得直接用口吸。

二、无菌间使用要求

1. 无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃,并要密封,不得随意打开,并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门,另设有0.5-0.7m2的小窗,以备进入无菌间后传递物品。

2. 无菌间内应保持清洁,工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒,擦拭工作台面,不得存放与实验无关的物品。

3. 无菌间使用前后应将门关紧,打开紫外灯,如采用室内悬吊紫外灯消毒时,需30W紫外灯,距离在1.0m处,照射时间不少于30min,使用紫外灯,应注意不得直接在紫外线下操作,以免引起损伤,灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭,除去上面灰尘和油垢,以减少紫外线穿透的影响。

4. 处理和接种食品标本时,进入无菌间操作,不得随意出入,如需要传递物品,可通过小窗传递。

5. 在无菌间内如需要安装空调时,则应有过滤装置

三、消毒灭菌要求

微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等,必须经灭菌后方能使用。

(一)干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法

1.灭菌前准备

(1)所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干,玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密,如用金属筒应将上面通气孔打开。

(2)装培养基的三角瓶塞,用纸包好,试管盖好盖,注射器须将管芯抽出,用纱布包好。

2.装放

(1)干热灭菌器:装放物品不可过挤,且不能接触箱的四壁。

(2)大型高压蒸气锅:放置灭菌物品分别包扎好,直接放入消毒筒内,物品之间不能过挤。

3.设备检查

(1)检查门的开关是否灵活,橡皮圈有无损坏,是否平整。

(2)检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位,关好门和盖,通蒸气或加热后,观察是否漏气,压力表与温度计所标示的状况是否吻合,管道有无堵塞。

(3)对有自动电子程序控制装置的灭菌器,使用前应检查规定的程序,是否符合于进行灭菌处理的要求。

4.灭菌处理

(1) 干热灭菌法:此法适应于在干热情况下,不损坏、不变质、不蒸发的物品、较常用于玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品等的灭菌。

① 器械器皿应清洗后再干烤,以防附着在表面的污物炭化。

② 灭菌时安放物品不能过挤,不要直接接触底和箱壁,物品之间留有空隙。

③ 菌时将箱门关紧,接上电源,先将排气孔打开约30min,排除灭菌器中的冷空气,温度升至160℃调节指示灯,维持1.5 –2h。

④ 灭菌完毕后或温度升温过程中,须在60℃以下才能打开箱门。

(2) 手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行:

① 手提式高压锅在主体内加入3L清水,立式高压锅加水16L(重复使用时应将水量补足,水变混浊需更换).

② 手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中(无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用)。

③ 盖好顶盖拧紧,勿使漏气;置灭菌器于火源上加热,立式压力锅通上电源,并打开顶盖上的排气阀放了冷气(水沸腾后排气10-15min)。

④ 关闭排气阀,使蒸气压上升到规定要求,并维持规定时间(按灭菌物品性质与有关情况而定)。

⑤ 达到规定时间后,对需干燥的物品,立即打开排气阀排出蒸气,待压力恢复到零时,自然冷却至60℃后开盖取物,如为液体物品,不要打开排气阀,而应立即将锅去除热源,待自然冷却,压力恢复至零,温度降到60℃以下 再开盖取物,以防突然减压液体剧烈沸腾或容器爆破。

(3) 卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行:

① 关紧锅门,打开进气阀,将蒸气引入夹层进行预热,夹层内冷空气经阻气器自动排出。 ② 夹层达到预定温度后,打开锅室进气阀,将蒸气引入锅室,锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出。

③ 待锅室达到规定的压力与温度时,调节进气阀,使保持恒定至

④ 自然或人工降温至60℃再开门取物,不得使用快速排出蒸气法,以防突然降压,液体剧烈沸腾或容器爆破。

⑤ 使用自动程序控制式压力蒸气灭菌器,在放好物品关紧门后,应根据物品类别按动相应开关,以便按要求程序自动进行灭菌,灭菌时必须利用附设仪表记录温度与时间以备查,操作要求应严格按照厂家说明书进行。

5.灭菌温度与时间(1) 干热灭菌器灭菌温度160℃,1.5-2h。(2) 压力蒸气灭菌锅灭菌温度与时间

(二)间歇灭菌方法

1.灭菌方法系利用不加压力的蒸气灭菌,某些物质经高压蒸气灭菌容易破坏,可用此法灭菌。

(1)将欲灭菌物品置于锅内,盖上顶盖,打开排水口,使器内余水排尽。

(2)关闭排水口,打开进气门,根据需要消毒10~20min。

(3)灭菌完毕关闭进气门,取出物品待冷至室温温度,放入37℃温箱过夜,次日仍按上述方法消毒,如此三次,即可达到灭菌目的。

2.血清凝固器使用方法,培养基中含有血清或鸡蛋特殊成份时,因高热会破坏其营养成份,故用低温,可使血清凝固,又可达到灭菌目的。

(1) 在使用该法灭菌的血清等分装时,需严格遵守无菌操作,试管、平皿也经灭菌后使用。

(2)将培养基按要求使成斜面或高层,加足水后,接上电源,升温75~90℃1h灭菌,放37℃温箱过夜,再如此灭菌三次。

3.煮沸消毒:可用煮锅或煮沸消毒器,水沸腾后再煮5~15 min,也可在水中加入2﹪石炭酸煮沸5 min,加入0.02﹪甲醛, 80℃煮60 min均可达到灭菌目的, 但选用煮沸消毒的增消剂时, 应注意对物品的腐蚀性.

4.灭菌处理:灭菌后物品,按正常情况已属无菌,从灭菌器中取出应仔细检查放置,以免再度污染。

(1) 物品取出,随即检查包装的完整性,若有破坏或棉塞脱掉,不可作为无菌物品使用。

(2) 取出的物品,如为包装有明显的水浸者,不可作为无菌物品使用。

(3) 培养基或试剂等,应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态,未达到者应废弃。

(4) 启闭式容器,在取出时应将筛孔关闭。

(5) 取出的物品掉落在地或误放不洁这处,或沾有水液,均视为受到污染,不可作为无菌物品使用。

(6) 取出的合格灭菌物品,应存放于贮藏室或防尘柜内,严禁与未灭菌物品混放。

(7) 凡属合格物品,应标有灭菌日期及有效期限。

(8) 每批灭菌处理完成后,记录灭菌品名、数量、温度、时间、操作者。

四、有毒有菌污物处理要求

微生物实验所用实验器材、培养物等未经消毒处理,一律不得带出实验室。

1. 经培养的污染材料及废弃物应放在严密的容器或铁丝筐内,并集中存放在指定地点,待统一进行高压灭菌。

2. 经微生物污染的培养物,必须经121℃30min高压灭菌。

3. 染菌后的吸管,使用后放入5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液中,最少浸泡24h(消毒液体不得低于浸泡的高度)再经121℃30 min高压灭菌。

4. 涂片染色冲洗片的液体,一般可直接冲入下水道,烈性菌的冲洗液必须冲在烧杯中,经高压灭菌后方可倒入下水道,染色的玻片放入5﹪煤酚皂溶液中浸泡24 h后,煮沸洗涤。做凝集试验用的玻片或平皿,必须高压灭菌后洗涤。

5. 打碎的培养物,立即用5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液喷洒和浸泡被污染部位,浸泡半小时后再擦拭干净。

污染的工作服或进行烈性试验所穿的工作服、帽、口罩等,应放入专用消毒袋内,经高压灭菌后方能洗涤。

五、培养基制备要求

培养基制备的质量将直接影响微生物生长。因为各种微生物对其营养要求不完全相同,培养目的的不同,各种培养基制备要求如下:

1.根据培养基配方的成分按量称取,然后溶于蒸馏水中,在使用前对应用的试剂药品应进行质量检验。

2.PH测定及调节:PH测定要在培养基冷至室温时进行,因在热或冷的情况下,其PH有一定差异,当测定好时,按计算量加入碱或酸混匀后,应再测试一次。培养基PH值一定要准确,否则会影响微生物的生长或影响结果的观察。但需注意因高压灭菌可影响一些培养基的PH降低或升高,故不宜灭菌压力过高或次数太多,以免影响培养基的质量,指示剂、去氧胆酸钠、琼脂等一般在调完PH后再加入。

3.培养基需保持澄清,便于观察细菌的生长情况,培养基加热煮沸后,可用脱脂棉花或绒布过滤,以除去沉淀物,必要时可用鸡蛋白澄清处理,所用琼脂条要预先洗净晾干后使用,避免因琼脂含杂质而影响透明度。

4.盛装培养基不宜用铁、铜等容器,使用洗净的中性硬质玻璃容器为好。

5.培养基的灭菌既要达到完全灭菌目的,又要注意不因加热而降低其营养价值,一般121℃15min即可,如为含有不耐高热物质的培养基如糖类、血清、明胶等,则应采用低温灭菌或间歇法灭菌,一些不能加热的试剂如亚碲酸钾、卵黄、TTC、抗菌素等,待基础琼脂高压灭菌后凉至50℃左右再加入。

6.每批培养基制备好后,应做无菌生长试验及所检菌株生长试验。如果是生化培养基,使用标准菌株接种培养,观察生化反应结果,应呈正常反应,培养基不应贮存过久,必要时可置4℃冰箱存放。

7.目前各种干燥培养基较多,每批需用标准菌株进行生长试验或生化反应观察,各种培养基用相应菌株生长试验良好后方可应用,新购进的或存放过久的干燥培养基,在配制时也应测PH,使用时需根据产品说明书用量和方法进行。

8.每批制备的培养基所用化学试剂、灭菌情况及菌株生长试验结果、制作人员等应做好记录,以备查询。

六、样品采集及处理要求

1.所采集的检验样品一定要具有代表性,采样时应首先对该批食品原料、加工、运输、贮藏方法条件、周围环境卫生状况等进行详细调查,检查是否有污染源存在。

2.根据食品的种类及数量,采样数量及方法应按标准检验方法的要求进行。

3.采样应注意无菌操作,容器必须灭菌,避免环境中微生物污染,容器不得使用煤酚皂溶液,用新洁尔灭、酒精等消毒药物灭菌,更不能含有此类消毒药物或抗生素类药物,以避免杀死样品中的微生物,所用剪、刀、匙用具也需灭菌方可应用。

4.样品采集后应立即送往检验室进行检验,送检过程中一般不超过3h,如路程较远,可保存在1~5℃环境中,如需冷冻者,则在冻存状态下送检。

5.检验室收到样品后,进行登记(样品名称、送检单位、数量、日期、编号等),观察样品的外观,如果发现有下列情况之一者,可拒绝检验。

(1) 样品经过特殊高压、煮沸或其他方法杀菌者,失去代表原食品检验意义者。

(2) 瓶、袋装食品已启开者,熟肉及其制品、熟禽等食品已折碎不完整者,即失去原食品形状者(食物中毒样品除外)。

(3) 按规定采样数量不足者。

对送检符合要求的样品,检验室收到后,应立即进行检验,如果条件不具备,应置4℃冰箱存放,及时准备创造条件,然后进行检验。

6.样品检验时,根据其不同性状,进行适当处理。

(1) 液体样品接种时,应充分混合均匀,按量吸取进行接种。

(2) 固体样品,用灭菌刀、剪取其不同部位共25g,置于225ml灭菌生理盐水或其他溶液中,用均质器搅碎混匀后,按量吸取接种。

(3) 瓶、袋装食品应用灭菌操作启开,根据性状选择上述方法处理后接种。

七、样品检验、记录和报告的要求

1.检验室收到样品后,首先进行外观检验,及时按照国家标准检验方法进行检验,检验过程中要认真、负责、严格进行无菌操作,避免环境中微生物污染。

2.样品检验过程中所用方法、出现的现象和结果等均要用文字写出试验纪录,以作为对结果分析、判定的依据,记录要求详细、清楚、真实、客观、不得涂改和伪造。

初中生物实验操作试卷

制作和观察洋葱表皮细胞的临时装片(p43)

实验用品:洋葱,稀碘液,清水,吸管,镊子,载玻片,盖玻片,吸水纸,纱布,刀片、显微镜

(一)使用显微镜观察人的口腔上皮细胞(p47)

实验用品:显微镜、载玻片、盖玻片、稀碘液、滴管、消毒牙签、擦镜纸、纱布、 吸水纸。

(二)徒手切片和观察叶片的结构(p113)

实验用品:新鲜叶片,清水,双面刀片(两个,并排在一起,一侧用胶布粘牢),载玻片,盖玻片,培养皿,滴管,吸水纸,纱布,毛笔,显微镜

实验一:口腔对淀粉的消化作用

器材:大、小烧杯,量筒、试管,温度计、滴管、淀粉糊,清水、碘液等。

实验步骤:

1.取两个试管,分别编为1号和2号,然后各注入2毫升浆糊。

2.取唾液: 用凉开水漱口后,略微张开口,舌尖抵在下颌门齿的下方,约3分钟,将下唇搁在一个小烧杯口上,唾液就会沿着下唇流入杯中。

3.向1号试管内滴入清水2毫升,向2号试管里滴入已准备好的唾液2毫升,然后震荡着两个试管。

4.同时把这两个试管放在盛有37℃左右温水(用温度计测得)的烧杯里。约过5分钟,同时取出这两个试管,冷却。

5.向冷却后的这两个试管里,各滴入两滴碘液。这时可以看到:1号试管里的浆糊变成了蓝色;2号试管里的浆糊没有变成蓝色。 6.举手示意监考教师检查。 7.实验完毕,整理材料用具。

实验二:鉴定食物的主要成分

1.从米饭或馒头上取一些碎屑,放在载玻片上。 2.在碎屑上滴一滴碘酒。

3.观察米饭或馒头颜色的变化,并得出结论。 4.取一些鸡蛋清,分别放进两只烧杯里。 5.其中一只加入少量开水,并迅速搅拌。 6.观察两只烧杯中的现象。 7.分析实验现象并得出结论。

8.拿一粒炒熟的花生种子,放在白纸上,用力挤压。 9.用牙签蘸很少一点食用油点在白纸上。 10.比较两张白纸上的现象,得出结论。

实验三:观察植物叶表皮的气孔

1.取一蚕豆叶片,把叶片的背面向里折叠,然后从折断处轻轻撕拉。 2.在折断处找到白色薄膜,这就是叶的下表皮。

3.用镊子夹取一小片下表皮,放在载玻片的水滴中。 4.用解剖针把它展平,盖上盖玻片,制成临时装片。 5.将制好的临时装片放在低倍显微镜下观察。 6.看到许多形状不规则的表皮细胞。

7.还看到成对的半月形保卫细胞,以及由保卫细胞间隙所形成的气孔。 8.画5-6个相连的蚕豆叶表皮细胞。 9.画一个由两个保卫细胞围成的气孔。 10.注明各部分的名称。

实验四:比较水果(蔬菜)中维生素C的含量

内容要求:利用维生素C可以使高锰酸钾溶液褪色的原理,尝试鉴定新鲜的水果或蔬菜中维生素C含量的不同。 材料用具:

新鲜水果(蔬菜)等汁液、质量分数为0.1%的高锰酸钾溶液、10mL量筒、试管、滴管。 评价标准:

1.量取1毫升质量分数为0.1%高锰酸钾溶液,分别加入到2只洁净的试管中。 (1分) 2.分别向两只试管中逐滴滴入两种不同的果(蔬)汁,并观察现象。(1分) 3.边滴入边震荡,观察现象,并记录滴数。(2分) 整理(1分)

整理材料用具,摆放整齐,擦净桌面。

问题回答(1分)根据实验现象说明水果(蔬菜)中维生素C含量的不同?

完全褪色时,滴入量多的维生素C含量越少;滴入量少的维生素C含量越多。

试题五: 探究吸入、呼出气体不同的成分 内容要求:

通过实验及实验分析,探究人体吸入的空气和呼出的气体成分有何异同

材料用具:澄清的石灰水,锥形瓶,玻璃导管,橡胶管,吸耳球,吸管,抹布,废液缸。 评价标准:步骤1、2共1分;步骤3、4、5共2分 1.取两只锥形瓶,分别编号A、B

2.取等量的澄清石灰水分别倒入A、B两只锥形瓶内

3.将玻璃导管分别插入A、B两只锥形瓶的石灰水中 4.分别用嘴和吸耳球向A、B两只锥形瓶的石灰水中吹气

5.反复吹一段时间后,对比观察A、B两只锥形瓶的石灰水变化情况 整理(1分)

整理材料用具,摆放整齐,擦净桌面。 问题回答(2分) 变浑浊;不变浑浊

生物实验:测定种子的成分

实验用品:晒干的小麦种子,小麦面团,滴管,试管,试管夹,酒精灯,纱布,

浸软的玉米(或小麦)种子,刀片,放大镜,碘液,小药匙,烧杯。