生物实验操作

范文一:生物实验操作

Hucker 改良的革兰氏染色法鉴定微生物

一、实验器材

1、设备:显微镜(尼康YS100、YS2-H)

2、材料:酒精灯、接种环、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)、载玻片、盖片、擦镜纸、白纸、革兰氏染色液(结晶紫染液、碘液、95%乙醇、番红液)、生理盐水

3、菌种:(1)大肠杆菌;(2)枯草芽孢杆菌

二、实验步骤

1、涂片

取一块洁净载玻片,在载玻片的左、中、右3处各滴加一小滴无菌生理盐水,且均匀分布,用接种环以无菌操作方式分别从大肠杆菌和枯草芽孢杆菌斜面上挑取少许菌苔于左、右一水滴中,从大肠杆菌斜面和枯草芽孢杆菌斜面上各挑取少许菌苔同置于中间一水滴中,分别混匀并涂成薄膜。

2、干燥

室温自然干燥。

3、固定

涂面朝上,通过火焰2-3次。

此操作目的是使细胞质凝固,以固定细胞形态,并使之牢固附着在载玻片上。

4、初染

滴加结晶紫液,以刚好将菌膜覆盖为宜,染色1-2min,水洗。

5、媒染

用碘液冲去残水,并用碘液覆盖约1min,水洗。

6、脱色

用滤纸吸去玻片上的残水,将玻片倾斜,在白色背景下,用滴管流加95%乙醇脱色,直至流出的乙醇无紫色时,立即水洗。

7、复染

用番红液复染约2min,水洗。

8、镜检

干燥后,用油镜观察,比较。

正确结果:菌体被染成深紫色的是革兰氏阳性菌,被染成红色的是革兰氏阴性菌。

三、要求

1、竞赛选题内容应在 2小时内完成;

2、载玻片要洁净无油迹;要用活跃生长期的幼培养物做革兰氏染色;涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性;

3、固定操作中,火焰不宜过热,以玻片不烫手为宜;

4、革兰氏染色结果是否正确,乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节。脱色不足,阴性菌被误染成阳性菌;脱色过度,阳性菌被误染成阴性菌;脱色时间一般为20-30s;

5、显微镜使用时,物镜应从低倍到高倍依次转换;

6、在显微镜视野下观察出两种菌(大肠杆菌;枯草芽孢杆菌)的形态,在混菌中区分革兰氏阴性菌和阳性菌,并作图;

7、写出实验报告,包括实验目的、原理、器材与材料、实验步骤、结果与讨论。

胰蛋白酶比活力的测定

一、实验原理

胰蛋白酶能催化蛋白质的水解,该酶对于由碱性氨基酸(如精氨酸,赖氨酸)的羧基与其他氨基酸所形成的肽键具有高度专一性。本实验利用胰蛋白酶能催化N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)水解生成N-苯甲酰-L-精氨酸(BA)的原理,进行胰蛋白酶的活力测定。由于BAEE在253nm处的紫外吸收远低于BA,而BAEE在胰蛋白酶的催化下逐渐生成BA,反应体系在253nm的紫外吸收值随之增加,因此可以以⊿A253nm来计算胰蛋白酶的酶活力。

胰蛋白酶的酶活力单位定义(底物BAEE):在本实验条件下,以BAEE为底物,每分钟使⊿A253nm增加0.001所需的酶量定义为1个酶活力单位。

二、实验器材

1、设备:分光光度计(UVmini-1240)、旋涡混合器(QL-901)、微量移液器。

2、材料:试管、试管架、石英比色皿、记号笔、枪头(1000微升、200微升、10微升)、5mL移液管、吸耳球、擦镜纸、滤纸、洗瓶、烧杯。

3、试剂:胰蛋白酶样品(浓度为mg/mL,体积为Xml,需用Tris-HCl缓冲液(水)自行稀释指定倍数后测定(这里可以指定几个倍数,视实际酶活力而定))、0.05mol/L pH 7.8 Tris-HCl缓冲液、2mmol/L BAEE。

三、实验步骤

1、取多支试管,分别标号为1、2、3、4…等,1号为空白组,其余为测定组,按照表1顺序加入各相关试剂。

表1. 胰蛋白酶活性测定加样程序 试剂/mL

0.05mol/L,pH 7.8 Tris-HCl缓冲液

待测胰蛋白酶

去离子水

2mmol/L BAEE

总体积 空白组 1.5 — 0.1 1.5 3.1 测定组 1.5 0.1 — 1.5 3.1

2、以空白组校正A253nm值至0,测定组中加入底物液BAEE后,立即混合均匀,用比色皿在UVmini-1240分光光度计上测定光吸收值A253nm,同时记录时

间。

3、每间隔1min读取A253nm值一次,至6min终止读数。

4、通过调节酶的浓度,控制测定组测得⊿A253nm/min在0.05-0.10之间数据视为有效。

5、计算每分钟平均A253nm增加值即⊿A253nm/min。

⊿A253nm =【(A6min-A3min)/3 + (A5min-A2min)/3 + (A4min-A1min)/3】/3

四、要求

1、竞赛选题内容应在 2小时内完成;

2、微量移液器在吸取液体时避免平置、倒置等状态,防止液体流入移液器腔体内;

3、微量移液器用后要调至最大量程放置;

4、测吸光度之前要分别用水和样品润洗比色杯;

5、滤纸用于吸干比色杯上残留的液体,擦镜纸用于擦试比色杯的光面;

6、比色杯用完后要用水清洗干净,并倒扣在平皿上;

7、写出实验报告,包括实验目的、原理、器材与材料、实验步骤、结果与讨论。

8、实验报告需计算出⊿A253nm/min、所用胰蛋白酶的总活力、胰蛋白酶的比活力。

范文二:微生物实验操作

油镜的使用和维护

目的:掌握油镜的使用与维护,熟悉油镜的使用原理。 材料:显微镜,拭镜纸,液体石蜡油,二甲苯

原理:油镜的透镜极小,工作焦距最短,光线通过玻璃和空气,由于介质密度不同发生折射,射入镜筒的光线极少,视野暗,物象不清晰。如在玻片与镜头(透镜)之间加上折光率和玻片(n=1.52)相近的香柏油(n=1.515)就可减少光线的折射,加强视野的亮度,获得清晰的物象。

步骤:显微镜油镜的使用和维护

1.将显微镜平稳地安放在实验台适宜处。识别油镜头:标有100×、OIL、HI等字样。

2. 打开电源,用低倍镜对光,打开光圈,调节聚光镜的位置,使视野光线充足。

3. 标本上加镜油一滴,转动粗螺旋,使油镜头缓缓下降,用眼从侧面观察,直到油镜头浸入油中接近玻片为止。

4. 从目镜观察,同时徐徐转动粗螺旋提升,见模糊物象后再用细螺旋调节,直到见到清晰物象为止。

5. 观察完毕,粗螺旋提高镜头,取下标本片,油镜头使用后立即用擦镜纸擦净镜头上的油。如油已干,可在擦镜纸上滴少许二甲苯擦拭,并立即用另一擦镜纸

擦去二甲苯,因二甲苯能溶解镜头上的固定胶以致使镜头脱落。

6.将镜头转呈“八”字,调低聚光器,对号送入柜子内存放。

革兰染色

目的:掌握革兰染色的原理及操作。

材料:干净玻片,接种环,葡萄球菌和大肠杆菌18-24h培养后的混合菌液,酒精灯,一套革兰染液

原理:主要为细胞壁结构的差异。G+三维肽聚糖结构的交联度大,通透性低,脂质少或无,酒精作用使孔径缩小;而G-肽聚糖为二维疏松结构,薄,外膜含大量脂质,易被酒精溶解,使细胞壁通透性增高,结晶紫-碘复合物被酒精溶解而脱色。

步骤:

1. 细菌标本的制作

(1)涂片:无菌操作。取一接种环混合细菌悬液,涂布成直径约1cm的涂片,涂片应薄而均匀。

(2)干燥:涂片最好在室温中自然干燥。必要时可将标本面向上,放在酒精灯上方微火处干燥。

(3)固定:标本面向上,在酒精灯火焰外焰按钟摆的速度来回通过3次,放置待冷后染色。固定的目的是

杀死细菌,使细菌与玻片黏附较牢固。菌体蛋白质变性后,提高与染料的亲和力。

2. 革兰染色

(1)初染:滴加结晶紫染液1-2滴于涂片上,1min钟后用自来水缓缓冲洗。

(2)媒染:滴加碘液1-2滴,1min后用自来水缓缓冲洗。

(3)脱色:加95%酒精数滴,摆动玻片使酒精与细菌充分接触,约20-30s后,立即用自来水缓缓冲洗。

(4)复染:滴加稀释碳酸品红液,30-60s后,自来水缓缓冲洗。

用吸水纸吸干后,用油镜观察。镜检后,载片放入消毒缸。

细菌特殊结构的观察

目的:观察并掌握细菌的形态及特殊结构。

材料:细菌鞭毛、芽孢、荚膜的标本片;革兰阳性菌、革兰阴性菌染色标本片

示教:

革兰阳性菌:葡萄球菌,紫色

革兰阴性菌:大肠杆菌,红色

细菌鞭毛

细菌芽孢

细菌荚膜

细菌的分布

目的:了解细菌在自然界中的分布情况。

材料: 普通琼脂平板培养基、血平板、镊子、无菌棉拭子、革兰染液。

操作步骤:

1.空气中细菌的检查

(1)采用沉降法:取普通琼脂平板培养基1只,任意置一处,启盖约15分钟,再盖上,37oC培养24小时,观察有无细菌生长。

(2)结果判定:培养基表面可见多种大小、形态不一的菌落。

2. 皮肤表面细茵检查

(1)采用涂抹法: 先在平板底面用记号笔分成两区,作标记,将未消毒的手指在平板的1/2处表面轻轻涂抹划线,然后用碘酒、乙醇擦拭手指皮肤,用消毒后的手指在平板另一1/2处进行涂抹,操作完毕,置37℃培养24小时后,取出观察结果。

(2)结果判定:培养基表面有几种大小及形态不同的菌落生长,注意比较消毒前后细菌的生长情况。

3.咽喉部细茵检查

(1)用无菌棉拭子在咽喉部涂抹后,涂在血平板上,并划线分离,37oC培养24小时后观察结果。注意观察平板上菌落种类以及是否有溶血现象,并可挑取菌落进行革兰染色检查。口腔微生物检查也可用无菌牙签直接挑取少量牙垢,制成涂片,进行革兰染色检查。

(2)结果判定:血平板表面有大小和形态不同的菌落,有的菌落周围可见溶血环。牙垢涂片镜检可见革兰阳性菌和革兰阴性菌。

紫外线杀菌实验

目的:掌握紫外线杀菌的原理,熟悉紫外线杀菌实验的操作。材料:大肠杆菌,琼脂平板,无菌回形状纸片,接种环,镊子,紫外灯.

原理:紫外线波长范围为240~280nm,最适的波长为260nm,这与DNA吸收光谱范围相一致。其杀菌原理是紫外线易被核蛋白吸收,使DNA的同一条螺旋体上相邻的碱基形成胸腺嘧啶二聚体,从而干拢DNA的复制,导致细菌死亡或变异。紫外线特点:紫外线的穿透能力弱,不能通过普通玻璃、尘埃。

步骤:

1.平板密集划线接种。

2.在平板上贴无菌回形纸片。

3.UV照射30min(打开平板盖子)。

4.取出回形纸,将回形纸放入消毒缸中。

5.37oC培养24h后观察结果。

细菌代谢产物观察和生长现象

目的:掌握细菌代谢产物的检测和结果的判断。熟悉细菌在各种培养基中的生长现象。

材料:各种生化管,大肠杆菌、伤寒杆菌、产气杆菌、变形杆菌等。

原理:不同菌的酶系统不同,对底物的代谢产物也不同,用生化的实验方法可将产物检测出来,从而对细菌鉴定。

步骤:

一、细菌代谢产物观察

1. 糖发酵实验

将大肠杆菌、伤寒杆菌分别接种在葡萄糖发酵管内,37℃培养18-24h进行观察。培养基中指示剂为溴甲酚紫。

如能分解葡萄糖,则产酸,培养基由原来的紫色变为黄色,记录符合为“+”。如同时还产生气体,则其中

倒置的小管中有气泡出现,记录符合为“⊕”。 如能分解乳糖,则产酸,培养基由原来的紫色变为黄色,记录符合为“+”。如同时还产生气体,则其中倒置的小管中有气泡出现,记录符合为“⊕”。如培养基未变色,仍为紫色,则表明细菌不能分解乳糖不能分解乳糖。记录符合“-”。

2.枸橼酸盐利用实验

该培养基中提供的唯一碳源是枸橼酸钠。指示剂是澳麝香草酚兰。分别接种大肠杆菌和产气杆菌,37℃培养24h进行观察.

若斜面有菌落出现,培养基由原来的绿色变为深兰色,表明细菌能利用枸橼酸钠,记录符合“+”,反之“-”。

3.靛基质吲哚产生实验

能产生色氨酸酶的细菌,可分解蛋白胨水培养基中的色氨酸,产生靛基质。将大肠杆菌和产气杆菌分别接种在蛋白胨水培养基中,37℃培养48h后,每管各加吲哚试剂(对二甲基氨基苯甲醛)3-4滴,若出现红色化合物-玫瑰色吲哚,表明靛基质产生阳性“+”;反之为阴性:“-”。

4. 硫化氢产生实验

有的细菌能分解含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸)产生硫化氢。将大肠杆菌和变形杆菌分别接种在这样的

培养基中,37℃培养18-24h。若培养基中出现黑色沉淀物即为阳性“+”,表明产生的硫化氢与培养基中的铅盐(或铁盐)结合,生成黑色的硫化铅(或硫化铁)。

二、细菌生长现象

1、在液体培养基上生长情况

(1)表面生长:液体清晰,细菌生长在液面形成菌膜。如枯草杆菌。

(2)混浊生长:液体均匀混浊,或有少量沉淀。如大肠埃希菌。

(3)沉淀生长:液体清晰,细菌生长在管底,形成沉淀。如链球菌。

2、在固体培养基上的生长情况

(1)菌苔:在琼脂斜面培养基上长成菌苔。

(2)菌落:在平板上形成肉眼可见的细菌集团,称为菌落。观察时要注意菌落的大小、形状、表面形状、边缘是否整齐、透明度、颜色等,可作为鉴别细菌的依据之一。

(3)色素:水溶性色素和脂溶性色素。

3、在半固体培养基上的生长情况

有鞭毛的细菌,由于能运动,在半固体培养基内沿穿刺线弥漫性生长,使穿刺线变得模糊不清。无鞭毛的

细菌,因为不能运动,接种生仍没穿刺生长,穿刺线与周围界限清楚。

凝集实验(玻片法)

目的:掌握抗原抗体反应的基本原理和特异性,熟悉

凝集反应的操作。

材料:伤寒杆菌A-F群O多价血清、志贺氏痢疾多价

血清、生理盐水、未知菌、玻片。

原理:颗粒性抗原(凝集原)与相应的抗体(凝集素)直接结合,在一定的条件下形成肉眼可见的凝集现象。如红细胞ABO血型的测定,测定细菌的细菌凝集实验。

步骤:

1.取清洁载物玻片一张,用蜡笔划为三格,并注明号码。于第一格和第二格内各加约30ul伤寒杆菌A-F群O多价血清及志贺氏痢疾多价血清,第三格内滴加

约30ul生理盐水。

2. 用接种环挑取待检菌种少许,分别均匀地涂抹于1、2、3格内的液体中。接种环每次使用前后均需经

酒精灯火焰烧灼灭菌。

3. 轻轻摇动玻片,数分钟后用肉眼观察结果,出现灰白色凝集颗粒者即为阳性反应;仍为均匀混悬液者为阴性反应。如结果不够清晰,可将玻片放于低倍显微

镜下观察。

沉淀反应(双扩散)

目的:掌握抗原抗体反应的基本原理和特异性,熟悉沉淀反应的操作。材料:干净玻片,玻璃蜡笔、打孔器、微量加样器、正常人血清IgG、羊抗人IgG

原理:将抗原与抗体分别加到电解质凝胶板相邻的两孔中,抗原与抗体双方自由扩散,在最适当比例处形成抗原抗体复合物(沉淀线)。

步骤:

1.制板:取干净玻片一片,用蜡笔分为三格,用吸管将4-5ml加热溶化的1.5%食盐琼脂充盈中格,制备琼脂板。

2. 打孔:待琼脂板凝固后,用打孔器打孔。孔间距约为5mm。

3. 封底:将打好孔的琼脂板凝板过火焰三次。

4. 加样:用微量加样器在三孔中加入生理盐水,正常人血清IgG和马抗人IgG。每孔加入约10μl。注意:加样时勿使液体溢出和孔内出现气泡。

5. 扩散:将琼脂板放入湿盘内,置37℃温箱中(均保持水平位置),于24小时后观察结果。

药敏实验(纸片法)

目的:掌握纸片法药敏实验方法,熟悉微生物培养,

了解抗生素对细菌的作用机制。了解含药纸片的制备 材料:大肠埃希菌,普通琼脂培养基,无菌镊子,打

孔器(直径6cm),抗生素纸片。

原理:药物在琼脂上扩散,形成浓度涕度,在一定的浓度下,对细菌抑制或杀死,浓度过低,则不能抑制

或杀死。从而形成一定大小的抑菌圈。

步骤:

1.平板上密集划线接种。

2.贴4-5种含抗生素的纸片于平板上。药片与平板边

缘相距至少1.5cm,药片之间相距至少2cm。

3. 37oC培养24h后观察结果。测量抑菌圈直径大小,

判断敏感性。

消毒剂对细菌的影响

目的:掌握含药纸片的制备。熟悉微生物培养,了解消毒剂对细菌的作用机制。

材料:大肠埃希菌,普通琼脂培养基,无菌镊子,打孔器(直径6cm),滤纸纸片(直径约6 mm),70%酒精,金星消毒水,紫药水、红药水。

原理:药物在琼脂上扩散,形成浓度涕度,在一定的浓度下,对细菌抑制或杀死,浓度过低,则不能抑制或杀死。从而形成一定大小的抑菌圈。

步骤:

1.平板上密集划线接种细菌。

2. 将无菌干燥的滤纸片放入各种消毒剂中浸湿,在容器边缘沥干,即为含药的滤纸片。

3. 将以上含药滤纸片贴于平板上,每块贴4种。药片与平板边缘相距至少1.5cm,药片之间相距至少2cm。

4. 37oC培养24h后观察结果。测量抑菌圈直径大小,判断抑菌效果。

(此材料来自精品课程)

范文三:生物实验操作实验

生物实验操作实验(一)考点及评分表

探究发生在口腔内的化学性消化

主考签字: 监考教师签字:

题目:探究发生在口腔内的化学性消化

实验目的:设计对照实验,探究唾液淀粉酶的消化作用。

材料用具:漱口杯、小烧杯(50ml)2个、量筒(10ml)2个,编上1、2号(10ml)的试管2支、备用试管2支,试管架、滴管、0.5—1%的淀粉浆糊、清水、恒温水浴锅、2%碘液等。 实验步骤: 1、取唾液

(1)用凉开水将口漱净。

(2)略张开口,舌尖抵在下颌门齿的下方(或口中含少许清水),约3分钟,将下唇搁在小烧杯口上,收集唾液。 2、设计实验并实施

(1)用量筒分别量取2ml淀粉溶液;注入编有1、2号的洁净试管中。 (2)再同时向两支试管内分别注入2ml唾液和2ml清水;充分振荡试管。 (3)将两支试管同时放在37℃(教师控制,可调至38-39℃)水浴中保温5—10分钟左右。

(4)同时取出两支试管稍冷却后各加入2滴碘液,振荡两支试管,观察现象。 3、实验现象描述

滴加碘液后,1号试管内液体呈现的颜色是_____________;2号试管内液体呈现的颜色是:____________。(举手示意监考教师检查实验结果、观察现象) 4、分析现象,得出结论:略 根据实验现象分析说明:

1号试管内:__________________________________________________ 2号试管内:__________________________________________________ 5、实验完毕、清洁整理实验器具和试验台(淀粉不要倒掉)。

题目:显微镜观察番茄果肉细胞

姓名: 班级: 学校:

实验内容要点: 1.制作临时装片;

2.用显微镜观察细胞的结构

实验材料用具:新鲜的番茄果实、显微镜(安装好放在实验台上)、洁净的载玻片和盖玻片、镊子、滴管、解剖针、吸水纸、清水、干净的纱布。 实验要求:

1、用纱布擦拭载玻片和盖玻片,用滴管吸取清水,在载玻片中央滴一滴清水; 2、制作番茄果肉细胞的临时装片

用解剖针挑取少许果肉细胞,在载玻片中央的水滴中均匀涂抹(果肉堆积过厚扣分),用镊子夹起盖玻片一端,使另一端先接触水滴,并缓缓盖上盖玻片,无明显气泡。

3、用低倍镜观察番茄果肉细胞(1)正确对光;(2)安放临时装片,调节粗准焦螺

旋找到物像;(3)调节细准焦螺旋,观察番茄果肉细胞。

4、绘图(绘图结束后请举手示意考评教师查看显微镜下的图像)

画成示意图,或者不是显微镜视野观察的图都扣分。错字扣分,没有写图名称的扣分,用箭头标注的扣分。

5、实验完毕,清洁整理材料用具、实验台,显微镜归位。

生物实验操作实验( 二)考点及评分表

观察番茄果肉细胞

合肥市四十五中2014年初中实验生物试题(A)

显微镜观察番茄果肉细胞

班级 学号 姓名

实验内容要点: 1.制作临时装片;

2.用显微镜观察细胞的结构

实验材料用具:新鲜的番茄果实、显微镜(安装好放在实验台上)、洁净的载玻片和盖玻片、镊子、滴管、解剖针、吸水纸、清水、干净的纱布。 实验要求:

1、用纱布擦拭载玻片和盖玻片,用滴管吸取清水,在载玻片中央滴一滴清水; 2、制作番茄果肉细胞的临时装片

用解剖针挑取少许果肉细胞,在载玻片中央的水滴中均匀涂抹(果肉堆积过厚扣分),用镊子夹起盖玻片一端,使另一端先接触水滴,并缓缓盖上盖玻片,无明显气泡。

3、用低倍镜观察番茄果肉细胞(1)正确对光;(2)安放临时装片,调节粗准焦螺

旋找到物像;(3)调节细准焦螺旋,观察番茄果肉细胞。

4、绘图(绘图结束后请举手示意考评教师查看显微镜下的图像)

画成示意图,或者不是显微镜视野观察的图都扣分。错字扣分,没有写图名称的扣分,用箭头标注的扣分。

5、实验完毕,清洁整理材料用具、实验台,显微镜归位。

合肥市四十五中2014年初中实验生物试题(B)

探究发生在口腔内的化学性消化

班级 学号 姓名

实验目的:设计对照实验,探究唾液淀粉酶的消化作用。

材料用具:漱口杯、小烧杯(50ml)2个、量筒(10ml)2个,编上1、2号(10ml)的试管2支、备用试管2支,试管架、滴管、0.5—1%的淀粉浆糊、清水、恒温水浴锅、2%碘液等。 实验步骤: 1、取唾液

(1)用凉开水将口漱净。

(2)略张开口,舌尖抵在下颌门齿的下方(或口中含少许清水),约3分钟,将下唇搁在小烧杯口上,收集唾液。 2、设计实验并实施

(1)用量筒分别量取2ml淀粉溶液;注入编有1、2号的洁净试管中。 (2)再同时向两支试管内分别注入2ml唾液和2ml清水;充分振荡试管。 (3)将两支试管同时放在37℃(教师控制,可调至38-39℃)水浴中保温5—10分钟左右。

(4)同时取出两支试管稍冷却后各加入2滴碘液,振荡两支试管,观察现象。 3、实验现象描述

滴加碘液后,1号试管内液体呈现的颜色是_____________;2号试管内液体呈现的颜色是:____________。(举手示意监考教师检查实验结果、观察现象) 4、分析现象,得出结论:略 根据实验现象分析说明:

1号试管内:__________________________________________________ 2号试管内:__________________________________________________ 5、实验完毕、清洁整理实验器具和试验台(淀粉不要倒掉)。

合肥市2014年初中毕业实验操作考试生物评分表

试题A: 显微镜观察番茄果肉细胞

监考老师:

合肥市2014年初中毕业实验操作考试生物评分表

监考老师:

范文四:中考生物实验操作试题

中考生物实验操作试题

实验一 显微镜的使用

材料用具:显微镜、一组目镜和物镜、擦镜纸、干净纱布、植物玻片标本(如双

子叶植物茎永久横切片)

注意:1.实验前取下显微镜的目镜和物镜,放入镜盒。 2.实验前将光圈调至最小。 评分细则:

主要实验步骤 一、取镜与安放

右手握住镜臂,左手托住镜座,将显微镜镜筒向前,镜臂向后,轻轻放在实验台上。镜臂靠近身体略偏左,镜座距实验台7cm。 二、对光

双手转动粗准焦螺旋,使镜筒上升,转动转换器,使低倍物镜对准通光孔。 左眼对准目镜,右眼睁开。同时转动反光镜,将光线反射到镜筒里,直到整个视野呈雪白色为止 三、放置玻片标本

将玻片轻放载物台上,标本正对通光孔的中心,用压片夹压住玻片的两端

四、观察

从侧面注视物镜,转动粗准焦螺旋,使物镜下降直至物镜距离标本2-3mm为止。

左眼注视目镜,转动粗准焦螺旋,使镜筒缓缓上升,直到视野中出现物象。微调细准焦螺旋,使物像更加清晰。尝试通过移动玻片的为止,使“e”字移动视野中央。 五、收镜

观察完毕,先提升镜筒,取下玻片标本。 转动转换器,使两个物体伸向前方。 将镜筒缓慢降至最低处。 将反光镜放在直立的位置。 将显微镜放回原处。

实验二 制作和观察洋葱表皮细胞临时装片

材料用具:显微镜、载玻片、盖玻片、刀片、镊子、解剖针、吸水纸、滴瓶、滴

管、干净纱布、清水、稀碘液、洋葱鳞片叶。

评分细则:

主要实验步骤 1. 制作临时装片

一、准备和取材

用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净; 用滴管在载玻片中央滴1-2滴清水。

用刀片切取一块洋葱鳞片叶或用刀片在洋葱鳞片叶上划“#”(大约0.5cm²),用镊子撕取洋葱鳞片叶的内表皮;把撕取的表皮浸入载玻片上的水滴中,并用解剖针展平 (2)盖盖玻片

用镊子夹起盖玻片,使它的一边先接触载玻片上的液滴,然后缓缓地放下,盖在

要观察的材料上。 (3)染色

把一滴碘液滴在盖玻片的一侧,用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引,使染液浸润标本的全部。

二、用显微镜观察洋葱鳞片叶表皮细胞 (1)取镜与安放

右手握镜臂,左手托镜座,把显微镜放在实验台中央略偏左,距实验台边缘约7cm。 (2)对光

上升镜筒,转动转换器,使低倍物镜对准通光孔

左眼注视目镜,右眼睁开,同时转动反光镜,使视野明亮 (3)安放玻片并调焦

将玻片轻放载物台上,标本正对通光孔的中心,用压片夹压住玻片的两端 双手转动粗准焦螺旋,使镜筒缓缓下降,同时眼睛从侧面看着物镜下降,直到物镜接近玻片

一只眼注视目镜,同时转动粗准焦螺旋,使镜筒缓缓上升至视野中出现物像,微调细准焦螺旋使物像清晰。 (4)观察

移动玻片,将物像移到视野中央,在低倍镜下观察洋葱鳞片叶表皮细胞 三、整理器材:显微镜恢复到实验前状态。

实验三 观察种子结构

一、 实验材料

镊子 、解剖刀、放大镜、碘液、浸泡过的种子(玉米种子、花生、大豆)、载玻片(培养皿) 二、 实验步骤

1. 观察菜豆种子的外形

外部结构:外形呈肾形,最外面是种皮以及种脐。

观察种子的内部结构:

a. 先剥去种皮:用镊子夹住种子,再用解剖刀沿种脐划开,再用镊子或者手

去除种皮。

b. 种皮的内部是胚。 胚包括胚芽,子叶(富有营养),胚芽、胚轴、胚根 把两片子叶分开,用放大镜观察,其中一片子叶上有胚芽、胚轴、胚根 胚芽: 是生有两片幼叶的部分(发育成幼苗的茎和叶) 胚根: 与胚芽相对的一端 (发育成幼苗的根)

胚轴: 连接胚芽和胚根的部分 (发育成连接根和茎部分) 子叶: 转运胚乳中营养物质供胚发育 2.观察玉米种子的结构:

a. 先找到有胚的一面,用镊子夹住玉米种子,用解剖刀从中间切开。

在纵剖面上滴上一滴碘液。被染成蓝色部分是胚乳(提供营养物质),未染色 的部分是种皮(果皮)和胚 胚芽(发育成茎和叶) 胚根(发育成根)

胚轴: 连接胚芽和胚根的部分 (发育成连接根和茎部分) 2. 整理实验材料

将废弃物放入垃圾盒内,整理好桌面。

实验四 制作和观察人的口腔上皮细胞

实验器材:

显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸、纱布、滴管、镊子、稀碘液、生理盐水(0.9%氯化钠溶液)、消毒牙签(一端尖,一端钝)、一次性杯子、擦镜纸(备用)、污物杯、垃圾桶。

(一) 制作口腔上皮细胞临时装片 (1) 准备和取材

用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净;用滴管在载玻片中央滴1-2滴生理盐水。清水漱口后,用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻刮几下,把牙签上的碎屑涂抹在载玻片上的生理盐水中。 (2) 盖盖玻片

用镊子夹起盖玻片,使它的一边先接触载玻片上的液滴,然后缓缓地放下,盖在要观察的材料上。 (3) 染色

把一滴碘液滴在盖玻片的一侧,用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引,使染液浸润标本的全部。

(二) 用显微镜观察口腔上皮细胞 (1) 取镜与安放

右手握镜臂,左手托镜座,把显微镜放在实验台中央略偏左,距实验台边缘约7cm。 (2) 对光

上升镜筒,转动转换器,使低倍物镜对准通光孔;

一只眼注视目镜,另一只眼睁开,同时转动反光镜,使视野明亮。 (3) 安放玻片并调焦 将玻片轻放载物台上,标本正对通光孔的中心,用压片夹压住玻片的两端; 双手转动粗准焦螺旋,使镜筒缓缓下降,同时眼睛从侧面看着物镜下降,直到物镜接近玻片; 一只眼注视目镜,同时转动粗准焦螺旋,使镜筒缓缓上升至视野中出现物像,微调细准焦螺旋使物像清晰。 (4) 观察

移动玻片,将物像移到视野中央,在低倍镜下观察洋葱鳞片叶表皮细胞 (三)整理好实验材料,放归原处。

范文五:微生物实验室安全操作

微生物实验室的安全操作规程

1 实验室安全

1.1 微生物实验室的生物安全性

1.2 科室安全文档

(a)生物危害防护:实际操作规程见(《实验室生物安全通用要求》,中华人民共和国国家标准GB19489-2004。2004-01-05发布,2004-10-01实施。)

(b)实验室安全:原则和措施见(《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》,中华人民共和国卫生行业标准WS 233-2002。2002-12-03发布,2003-08-01实施。)

1.3 应用:

以上的操作规程应用于微生物科室的所有部门。工作人员或访问人员必须遵守各项规定。

1.4 关于新规定或现行规定的修改案:

任何新规定或现行规定的修改案必须通知负责科室安全的人员及相关人员,他们将建议科室主任考虑实施。

1.5 生物性危害

1.5.1 与各种操作有关的生物危害水平取决于:

a.处理的传染性物质的本身:

按照传染性物质对个人和社区的潜在危险性以及经空气传播的可能性,其划分成不同等级。所采用的等级划分详见"《实验室生物安全通用要求》";原则和措施(见《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》)。

b.使用的设备和设施:

处理不同等级的传染性物质的要求在"实验室安全"中已规定。这些符合要求的设备都要承担重要临床工作,科室负责人必须保证中应污染物水平。

c.培训,特别是员工的安全性培训和安全性经验积累。所有员工应该接受一定训练,能安全处理任何实验室可能碰到的物质,避免将实验不能处理或规定之外的传染性物质暴露在实验室,即使暴露事故在实验室,即使暴露事故发生也要会正确处理。

1.5.2 传染性物质的分类

1.5.2.1分类系统

生物危害防护:[见1.2 (a)],根据生物因子对个体和群体的危害程度将其分为4级,危害等级Ⅳ最具危害性。

1.5.2.2危险群/生物安全水平:1-4

a.危险群/生物安全水平:1——对健康成人无致病性,对社区无危害性。通常一般微生物操作就足够,不需特殊安全设备,工作的附近要有洗手设施。培养基上包含未鉴定物,因此,妥善处理对各级安全水平都至着重要。

b.危险群/生物安全水平:2——人类疾病相关物质,这种物质对实验室工作人员有中度危险,并具有一定程度社区危险性。医院微生物室所涉及的绝大多数物质属此安全水平,生物危害警告应张贴,并且限制接近,应用醒目标语,若是能产生空气传播或飞溅的I,II类物质都应使用相应的操作台。实验室应提供类似防护衣、手套和眼罩,尤其是配戴隐形眼镜者,也应提供类似安全水平的洗手设施,并且临近工作区也应有高压灭菌装置。所有废物和反复使用设备的去污染应有特定的程序。

c.危险群/生物安全水平:3——人类疾病相关物质,具有潜在空气传播性,能引起严重的、致命的疾病,对实验室工作人员高度危险,并具有一定程度社区危险性。所有含有或怀疑含有生物3级物质的标本必须标以"小心污染"标签,并且同时标于盛放标本容器和申清单。应对所有血液、体液、分离的人体组织等有普通防护意识,它们都应被视作传染源。在此生物安全水平等级,实验室应控制对其接近。凡涉及该类物质都应使用I或II类工作台操作,也可以遵循II级操作注意事项,对所有废物进行去污染处理,包括工作服和重复使用设备。

d.危险群/生物安全水平:4——对个人的危险如生物安全3级,但对社区有高度危险性。这些传染性物质包括:

蜱源性脑炎病毒

支里半亚-刚果牛血热病毒 Marburg Virus

艾波拉病毒 Lagsa fever Virus Junin HF Virus Machupo HF Virus

Guanaruto HF Virus

Herpesvirus simiae (B Virus)

1.6 以下预防措施,所有实验工作人员必须遵守:

1.6.1 工作服

a.所有实验室成员在工作期间必须始终穿着所提供的工作服。离开实验室时,工作服须挂在指定地方,不得在实验室外冼工作服。

b.在处理含有或怀疑含有生物安全3级物质的标本时,必须在工作服外穿隔离衣。 c.在生物安全操作台内处理标本和培养基时,必须戴手套。

1.6.2 洗手池

洗手池须供应洗洁剂和纸巾。

1.6.3 洗手

所有工作人员在离开工作区必须洗手,并且要先脱去工作服和手套。

1.6.4 食物、饮水、吸烟、化妆品

食物和饮料不允许带入任何处理标本的房间。不允许在处理标本的任何地方吸烟。不允许在处理标本的任何地方使用化妆品。

1.6.5 伤口和擦伤

手上的伤口和擦伤必须覆盖保护物。

1.6.6 个人衣物

个人衣物不允许带入实验室,并且必须保存在带锁的柜子里。

1.6.7 口吸移液管

这是禁用的。要求使用机械移液装置。

1.7 常规预防措施应用于所有血液、体液、组织标本的操作中:

1> 无论何时都应尽可能避免使用注射器、针头或其它锐器。

2> 使用过的针头和一次性切割器必须丢入专门的带有盖子的桶内,以备安全处理,防止容器过满盛装。

3> 使用过的针头不许重新使用或再用手操作。

4> 打烂的玻璃必须放入坚硬的容器(不要用手),然后再放入黑色垃圾袋,如果是污染的,使用黄色垃圾袋。

5> 在接触具有潜在性传染性标本培养基、组织,必戴保护性手套,防止皮肤直接接触。如果手套有可见的污染,必须先除去污染,再更换。手上有皮炎或伤口

的工作人员的需要间接接触传染性物质的人员应戴保护性手套。

6> 在处理完标本、结束工作,甚至在上述规定带手套时,应常规洗手。

7> 当血液、血液制品或其它体液污染发生时,应停止工作洗手,戴一次性手套再清除污染区。建议用含有效氯1000ppm的次氯酸钠溶液。如果污染区较大用浸有次氯酸钠溶液的湿布覆盖10min去污染,并标示相应的警告,丢弃废物及手套到生物安全级物理容器。注意飞溅的水滴和流淌的水会将污染带到主污染区以外。

8> 所有在实验室使用的具有潜在污染性的物质都需去污染,最好先高压,再做处理。

9> 任何可能产生飞溅或气雾的操作都应在生物安全操作台里进行。这些操作包括离心,分离血清,混合,超声,收集组织受精卵,以及处理含有浓集的感染物质标本。

1.8 实验室物质处理

a> 黑色塑料袋用来收集未污染或经高压处理的废物。

b> 废纸篓用来收集未污染的废纸、用过的纸巾等。

c> 所有可能传染的物质必须高压或焚化。

d> 所有丢弃的标本、培养基和实验室废物必须放在专门容器里

e> 用白色聚丙烯罐盛装2%新鲜配置次氯酸液,以临时放置工作中丢弃的标本、污染吸头和棉拭子,待一天工作结束之后,再经高压处理。

f> 黄色塑料袋用来处理污染的实验室废物。它们应封口,再由工人拿去焚烧。 g> 带盖、带标签硬质容器用来盛装针头等锐器。

1.9 实验室传染性物的消毒

高压

a.所有培养基的传染性物质都要高压,除非准备焚烧的,高压的最大好处是使传染性物质离开实验室可保证安全。

b.用作此目的的高压设备应在医学技师监督下由实验室工人操作。

c.高压设备应定期由医院设备组测试、检修。这些测试包括商业使有的芽胞试纸实验。多个高压设备应有使用记录,并自使用之日起由医学技师连续记录。任何不符都要向安全人员报告。

1.10 去污染

去污染剂:

1> 次氯酸溶液:用白色聚丙烯罐装新鲜配置的含有效氯1000ppm的2%次氯酸溶液,放在多个工作室。

2> 5%的Printol:其50%水溶液用来处理溅在地板和家具上的污染。

3> 戊二醛:新鲜配制成一定浓度,主要用于不能使用次氯酸钠的仪器去污染,如离心机等。

4> 75%乙醇:主要用于对清洁表面的快速去污染。

1.11 离心机

1.11.1 注意事项:

a> 使离心机用的试管应具是厚管或塑料的,离心前应仔细检查是否缺损。

b> 离心机需放置在合适的位置,操作都应能看见离心缸,以便能正确地将离心架放在转子上。

c> 离心桶和离心架配对使用,负载后需仔细平衡。

d> 为避免脱架和试管内溶液溅出,开始采用低转速,然后逐渐升高。

e> 离心机内缸应由高级人员定期检索,内壁必须用戊二醛定期清洁,去污染。 f> 在对含有或怀疑含有生物安全操作3级标本离心时,必须加盖密封,密封盖只有在一级生物安全操作台内才能打开。

1.11.2 离心时,试管破裂

a> 如果正在离心时,发生或怀疑发生试管破裂,电动机应立即断电,并在30min后才能打开离心机盖。

b> 如离心后发现破裂,应立刻关闭机盖,保持至少30min。

c> 立即通知安全员。

d> 戴厚手套,使用镊子或用镊子夹棉鉴清除破碎玻璃碎片。

e> 所有破裂试管,玻璃碎片,离心桶和转子必须放在专门消毒剂中去污染,要求消毒剂不具腐蚀性,对浸生物安全物质有效。然后,或者浸泡至24小时,或者高压。

f> 未破裂,带盖的试管也应放在另一含有消毒剂的容器中1后,再对其内容物处理。

i> 离心缸必须用戊二醛棉拭子清洁,过夜,再重复擦拭,再用水清洁洗净并干燥。 g> 含有生物安全3级物质的密封离心桶必须在密封状态下取出,在一级生物安全操作台内打开。如果试管破裂,离心桶密封盖应松松地盖上,对离心桶高压。

1.12 破裂和溢出

任何重要的破裂的溢出都应通知安全人员。在处理含有或怀疑含有生物案例的溢出物,应先得到安全人员的建议。

1.12.1 病毒培养基的泄漏

a> 用浸有20%次氯酸钠的纸巾覆盖溅洒出的污染物用容器碎片。

b> 覆盖10-15min。

c> 戴一次性手套,清扫纸巾和碎片于合适的容器(如塑料袋,但不包括含有碎玻璃或其它锐利物体),用一片硬纸板去清扫,不能用刷子或尘掸,除非它们适于高压。手指远离碎玻璃。

d> 将碎片和使用后的废物放在实验室废物箱。

e> 用常规工作消毒剂擦拭污染区及其周围可能飞溅区。

1.13 泄漏的标本

实验室不泄漏的标本,但要以塑料密封后退还到病房。

1.14 紫外线消毒:培养基,试剂分装和病人血清应存放-70°C和-30°C冰箱。操作存放于-30°C或以下温度冰箱物质,应戴手套,例如当标本从低温冰箱取出或放入时。

1.15 生物安全柜(台)

实验室应配备II级生物安全柜。

1.15.1 级别

I :基本要求:定向流动保护,要求气流从外流入安全柜,并且远离操作者,指向传染物。经HEPA过滤排后,紧好由导管引向室外,以便清除去污染后的各种蒸汽。

II:基本要求:经过滤气体垂直流向,既保护操作者也要保护工作不受污染。 IIA:70%的过滤气体重新循环至工作区,废气导向室外经HEPA过滤。和内流经式工作区的气流速度平均0.4m/s或略高。

IIB:流进气体流速平均0.5m/s或更好。按照不同型别(IIB1,IIB2,IIB3),气

体排出比例从70%到100%。根据工作选择不同型。如有毒化学物质和放射线同位素不能再循环至工作区。

III :基本要求:操作者与传染物安全隔离,并且整个操作过程都要提高。安全柜所在的环境也要一定程度隔离,以防手套破裂。

1.15.2 生物安全柜的安装

安全柜要发挥某安全防护功能必须注意安装位置,废气应通过管道以保护环境不受污染。如果需购置这类设备应联系CUHK安全办公室,在种类,牌子,样式,安装位置和安装以及与其它设施的相邻关系上获得指导。

1.15.3 常规检查和安全操作以及工作区的消毒

有一份操作规程详尽地叙安全柜的常规使用也应包括安全柜发生意外时应采取的行动。每一个使用者必须阅读规程使后签名。

1.15.4 注意:

安全柜应尽可能避免使其处于不安全状态,但有时因为安全柜的意外,使用者被迫这样做。此时,应张贴注意以警告其它人不得再使用。

1.15.5 去污染和再认证

由受过训练的人员,配戴个人防护用具,来做污染工作。要求:安全柜在密闭条件下用干燥多聚甲醛蒸汽醺蒸,使用浓度8500ppm。(安全柜的体积应包括外周供应和废气过滤设备。)在温度20-25°c,相对温度不低于60%环境保持4h,甲醛蒸汽,如果允许,可直接抽出室外,若不允许可在安全柜内用氨基重碳盐吸收。 因为空气有限的穿透力,在处理潜在传染性物质时最好使用HEPA过滤器,以及高压或焚化后再丢弃。

1.17.5.2 再认证

这项工作由专门人员进行,去污染后安全柜性能再认证定,及过滤器的更换,测试是否有漏气,调试空气流速是否合规定,以及检测过滤器的性能。再认证应至少一年做一次,或是装置移动,过滤器维修后。应备有去污染,维修和再认证的记录,并且应方便使用者的查阅。

2. 实验安全操作程序:

2.1 工作人员在采集标本过程中应当防止病原微生物扩散和感染,并对标本的来源、采集过程和方法等作详细记录。

2.3 实验过程中绝对禁止吸烟、饮食等,不要以手抚头面部等。

2.4 处理样本的过程中易产生高危害气溶胶时,要求同时使用适当的个人防护装备、生物安全柜和/或其它物理防护设备。如可产生含生物因子的气溶胶,应在适当的生物安全柜中操作。细菌的分离培养、菌种开封、转种、研磨、稀释等操作,均应在生物安全柜中进行。

2.5 使用接种环进行操作时,接种环应在工作灯的内焰中燃烧,以避免菌液或菌块飞溅。

2.6 稀释菌液时,吸管、针管要缓慢插入试管或烧瓶底部,小心操作避免产生气泡或气溶胶。

2.7 使用注射器加样时,用过的针头切勿再重新入套或拔开注射器与针头,应直接放入锐器收集器,以免划破皮肤造成接种感染。

2.8 菌株库要设专人管理,并按照国家微生物菌毒种管理办法执行。2.9进行毒菌操作过程中,不要穿戴巳经污染的防护性手套触摸门柄、仪器或毒菌区以外区域,避免由于粗心扩大污染范围。

2.10 试验结束后,操作过程中所有可能与生物危险物接触或被污染的试验器械和物品,能够高压消毒的必须高压消毒,不能进行高压消毒的设备、仪器,应使用有效的消毒剂擦洗后再以紫外灯近距离长时间消毒。

2.11 实验中发生意外污染情况,应立即通知主管人员并做好处理污染物和相应区域的准备,不得擅自采用其它禁止的方法进行消毒处理。

2.12 实验室内任何微生物的样本,废弃物都必须经高温高压灭菌后,方可按一般垃圾处理。

2.13 实验室所用任何个人防护装备应符合国家有关标准的要求。实验室应确保具备足够的有适当防护水平的清洁防护服供使用。还应穿戴其它的个人防护装备,如手套、防护镜、面具、头部面部保护罩等。

3. 实验室污物处理及消毒操作程序:

3.1 实验室含有生物危险物的临床标本及被污染的一次性用品,试验完成后,应在操作台或实验区域内以紫外灯近距离照射消毒 2小时以上,再经高压消毒后方可丢弃或焚烧。

3.2 可重复使用的实验用品及器材,完成实验后,应在操作台或实验区域内经紫

外灯近距离照射消毒2小时以上后,再交有关人员进行高压消毒和煮沸洗刷。

3.3 实验用的试管、吸管、注射器,须装在加盖不漏的容器内,经高压灭菌后取出。

3.4 培养物或实验室垃圾,在丢弃前必须经高压消毒和紫外灯近距离长时间照射处理。不允许积存垃圾和实验室废弃物。已装满的容器应定期运走。在去污染或最终处置之前,应存放在指定的安全地方,通常在实验室区内。

3.5 实验室废弃物应置于适当的密封且防漏容器中安全运出实验室。有害气体、气溶胶、污水、废液应经适当的无害化处理后排放,应符合国家相关的要求。

3.6 实验过程中,如标本或含标本的前消化处理液被打翻污染了操作台或地面,应以吸满70%酒精的卫生纸覆盖污染区,15分钟以后卫生纸方可移去。

3.7实验室内未经消毒的污水,禁止直接排入公共排水系统,更不允许混入居民生活垃圾。

4. 意外事故处理程序:

4.1 如果发生意外,必须立即通知实验室主管人员和医院生物安全办公室,并在有关人员的指导监督下对出事现场进行处理,绝对禁止未经报告而私自对出事现场给予非规范的处理。

4.2 实验过程中,如污染物溅落到身体表面,或有割伤、刺伤、烧伤、烫伤等情况发生,应立即停止实验工作进行紧急处理,更换被污染的实验服,皮肤表面用消毒液清洗,伤口以碘酒或酒精消毒,眼睛用无菌生理盐水冲洗。

4.3 如果发生菌液溢出,含菌种的培养管破碎等,造成中 、小面积污染,可用比污染面积大25%以上的纱布覆盖污染区域,边缘用脱脂棉围住,向纱布倾倒5%苯酚溶液或70%的酒精,浸泡2小时以上(其间适量加溶液防止干燥),再经紫外灯近距离(1米内)照射2小时以上;被污染的器械、容器等立即浸泡于70%酒精中2小时以上,再次着防护衣进入房间,将污染溢出物和用于清洁的纱布放入可耐受高压的双层塑料袋内并尽快高压。

4.4 如果发生气溶胶污染或大面积污染,应立即停止实验并关闭实验室,对污染区域进行紫外灯照射消毒过夜;第二天对污染区进行24小时封闭空气熏蒸消毒(乙醛消毒法﹕5ml乙醛+2g高锰酸钾/m3空间)。

4.5 临床医务人员应对事故受害者和消毒人员进行医学随访。

范文六:中考生物实验操作考试

实验三:观察叶片的结构

叶是植物体进行光合作用的主要器官,用显微镜观察叶下表皮和叶的横切结构,可以识别叶与光合作用相适应的结构特征。 【活动目标】

1.练习制作徒手切片;

2.用显微镜观察叶的横切面和表皮,识别叶片的结构; 3.初步学会画叶片的表皮细胞图。 【材料器具】

鲜嫩的植物叶片(如菠菜、青菜、蚕豆、槐和大叶黄杨)、双面刀片(每组2片)、镊子、盛有清水的培养皿、滴管、纱布、载玻片、盖玻片、显微镜。 【方法步骤】

1.制作叶片的临时切片

(1)取一片双子叶植物的叶片,放在载玻片上。

(2)用手捏紧并排的两个刀片,切割载玻片上的叶片。 注意:刀片很锋利,使用时要小心!

(3)重复切几次,每切一次,刀片要沾水一次,以便将切下的叶片薄片放入盛有清水的培养皿里。

(4)用镊子从水中选取最薄的叶片切片,放在一张洁净的载玻片上,制作成临时装片。

2.观察叶片的结构

用低倍显微镜观察叶片的临时切片,找出薄而比较完整的叶片部位,对照教材图5-9观察叶片的结构,区分出上表皮、下表皮、叶肉和叶脉,识别各个部分的细胞结构特征,并思考有关问题。

(1)叶片的上表皮和下表皮细胞的颜色为( )。细胞的排列状况为( )。

(2)叶肉栅栏组织接近表皮,细胞形状为( ),细胞的排列特点是

( ),细胞内部叶绿体数量( ); 叶肉海绵组织接近( )表皮,细胞的排列特点是( ),细胞内部叶绿体数目( )。

(3)叶脉贯穿叶肉组织中,叶脉细胞颜色为( ),排列( )。 3.观察叶片的下表皮

(1)用镊子撕下一小块双子叶植物(如蚕豆)叶下表皮,制成临时装片。 (2)用低倍显微镜观察叶表皮上呈半月形的细胞,就是( ),与一般表皮细胞相比,这种细胞的细胞壁特点是( );细胞排列方式上的特点为( )。气孔由( )个( )组成,气孔是( )和( )进出叶片的门户。

(3)画出叶片下表皮上由两个保卫细胞组成的气孔及与其相连的几个表皮细胞图。

【讨论】

1.观察叶片的横切面结构时为什么要制作很薄的临时切片?

2.在叶片结构的哪些细胞内部有绿色颗粒结构?叶片内绿色颗粒结构的分布有什么特点?

【思考】

叶片有哪些结构是与光合作用相适应的?

(1)叶片能最大程度吸收和利用光能( )。

(2)叶片在光下能吸收二氧化碳为光合作用提供原料( )。 (3)运输光合作用需要的水分,把叶片中合成的光合作用的产物运到植物体的其他部分( )。

(4)防止水分蒸发,避免植物萎蔫,保证光合作用所需水分( )。 分享

1

探究比较不同蔬菜中维生素C的含量

一、实验前学生讨论:

1、探究比较不同蔬菜中维生素C的含量是否一样的理论依据是什么?

2、实验过程中为什么要使用同一滴灌?

3、为什么第二次使用滴灌前需要将滴灌清洗干净并用吸水纸吸干?

二、实验过程:

(一)提出问题:

不同蔬菜中维生素C的含量一样吗?

(二)作出假设:

不同维生素C的含量不一样。

(三)制定计划:

选用两种不同的新鲜蔬菜分别榨汁,使用高锰酸钾溶液退色来比较它们含量的多少。

(四)完善计划:

1、选取两种不同的新鲜蔬菜分别榨汁并分装

2、分别往两支试管中注入相同浓度的高锰酸钾溶液2ml.

3、将其中一种蔬菜汁的汁液滴入一只盛有高锰酸钾溶液的试管边滴入边震荡,直至褪完色为止,记录下所滴的滴数,然后 将 滴管清洗干净再用吸水纸吸干,同理记录下另一组所滴的滴数。

(五)实验结论:

根据以上实验结果即褪色各需的底数判断维生素C含量的多少,所用滴数越少证明维生素C的含量越高,从而得出结论:不同蔬菜中维生素C的含量不一样。

(六)表达交流:

各实验小组将实验数据及结论进行交流看是否一致,并分析原因。

三、教后反思:

此探究实验应注重让学生掌握六个基本环节以外,还应该让学生理解实验过程中为什么要使用同一滴灌?为什么第二次使用滴灌前需要将滴灌清洗干净并用吸水纸吸干?并要求学生进一步拓展分析实验结果。

以探究水果中维生素C的含量

提出问题:不同水果中维生素C的含量相同吗?

作出假设:不同水果中维生素C的含量不同

制定计划

实验材料、用具:橘子、苹果、榨汁机(或研钵)、小烧杯、试管、滴管、高锰酸钾等。 实验步骤:

(1)将橘子和苹果去皮后放在榨汁机(或研钵)中榨出汁液;

(2)将两种新鲜的汁液分别倒入两个洁净、干燥的小烧杯中;

(3)取两支干燥、洁净的试管,分别标号为1号和2号,并分别注入浓度相同的高锰酸钾溶液2毫升;

(4)取干燥、洁净的滴管,吸取橘子的汁液,逐滴滴入1号试管中,边滴边振荡、边观察,直到高锰酸钾溶液颜色完全褪去为止,记录下滴入汁液的滴数;

(5)参照步骤(4),用另一只干燥、洁净的滴管测试苹果汁液并记录下滴数。 实施计划:

将两种汁液的滴数进行比较。

得出结论:

表达交流:小组间交流探究过程中成功和失败的原因,以便积累经验指导以后的探究活动。

解读“中考生物实验操作考试”

文章来源:邯郸市教育科学研究所 周晓莉

阅读:93次 2011-4-8 16:23:50 发布人:周晓莉

根据省教育厅有关中考的文件精神,结合我市实际,经邯郸市教育局研究决定:2011年全市将初中物理、化学、生物实验操作考试成绩计入中考总分。初中生物实验操作考试成绩今年首次计入中考总分,是我市教育评价改革的一项新举措,是深化“校本革命”的一项具体体现。

初中生物实验操作考试内容的依据是《全日制义务教育生物学科课程标准(实验稿)》,主要考试学生的动手实践能力,力求做到科学、规范、准确,以期达到培养学生创新意识、创新精神和提高动手实践能力的目的。

一、初中生物实验操作考试成绩计入中考总分的积极意义

(一)有利于促进实验教学,培养学生的实践能力

生物学属于自然科学,其专业性强、科学性强、实践性强。因此可以说生物学是一门实验学科,生物课有很多内容需要在实验室完成,通过实验探究来完成教学任务。然而由于以前生物不参加中考,大部分学校生物实验室被挤占,一些薄弱学校甚至连基本的生物器材还不配套,很多实验无法进行。教师只能在实验课上讲实验,在黑板上做实验,使原本丰富多彩的生物课失去了魅力而枯燥无味。将初中生物实验操作考试成绩计入中考总分,在某种程度上会促进学校对生物实验设备的投资从而改变生物实验教学,改变学生“高分低能、动手能力”差的状况,以便培养学生的创新精神和实践能力。

(二)有利于学生主动学习,促进全面发展

新课程倡导探究式学习,注重知识的形成过程,培养学生的创新精神和实践能力。把初中生物实验操作考试成绩计入中考总分,能够调动学生的学习积极性,激发学习兴趣,引导学生主动学习,自主探究,学生的主体性才能得到发挥,创造力得以开发,情感态度与价值观得以陶冶。再者新课程强调学科教学内容具有开放性、交叉性、综合性、整合性,而且学科知识是互相渗透的,如物理、化学的某些内容与生物知识是密切相关的,生物知识学不好,也会影响其他学科的学习。初中生物实验操作考试成绩计入中考总分,使学生不再“偏科”,能够全面发展。

(三)有利于高中生物教育,帮助学生提高高考成绩

初中和高中的教学课程是连续的,初中教学是高中教学的基础。以往初中生物教学与中考无关,使很多初中生在学习时很不认真,造成了初中与高中之间的学习中断,使学习缺乏连续性,高中教学往往花费大量时间补习初中课程,而这时学习任务重、时间紧,学生只能

死记硬背,造成知识不能融会贯通,导致高中知识的学习有所障碍,最终影响到高考成绩的提高。

(四)有利于稳定生物教师队伍,调动教师的积极性

有一支强大的专业化教师队伍,是提高教学质量的重要条件。2009年我们曾经对全市初中生物教师情况进行了调研,结果显示我市各县的初中生物教师,有百分之九十以上都没有学过专科生物课程,甚至有四个县没有一位生物专业毕业的生物课教师。还有很多学校的校长在招聘教师时,坚决不要生物教师,宁肯让语文、数学老师严重超额,然后去兼教“副科”,有些生物专业的高校毕业生选择了改行,这都是生物与中考无关的后遗症。初中生物实验操作考试成绩计入中考总分,使初中生物在中考中有了一席之地,这不但能够稳定现有的教师队伍,而且还能吸引一部分改行教师重新回来。能够激发生物教师的教学积极性,全身心投入到生物教学中,促进教师的角色尽快发生转变,改变传统的教学方式,以适应新课改的需要,进而推进素质教育的实施。

(五)有利于提高学生的科学素养

学生将来参加社会活动、经济活动、生产实践和个人决策所需要的科学知识、探究能力以及相关的情感态度与价值观,都需要生物科学教育参与其中。初中生物新课程实施中积极开展探究性学习,让学生通过类似于科学家科学探究活动的方式获取科学知识,并在这个过程中形成对生命科学的正确认识,学会科学的方法和技能、科学思维方式,增强独立思考的能力,养成实事求是的科学态度。初中生物实验操作考试成绩计入中考总分可以更好的促进初中生物新课堂创建活动深入开展,帮助学生树立探究创新的科学精神,以便学生将来更好地进行社会实践。

二、解读“误区”

1.会增加学生负担

有的人认为初中生物实验操作考试成绩计入中考总分会增加学生的学习负担。

教育改革的目的是为了全面提高受教育者的基本素质,“一切为了每一位学生的发展”是新课改的核心理念。中考科目的多少,与学生学习负担的轻重没有直接关系。将初中物理、生物和化学实验操作考试成绩计入总分,目的是要提高学生动手动脑、解决实际问题的能力。考试范围为教育部颁布的九年义务教育物理、化学、生物教材规定的学生实验,这些实验都不是很难,只要考生熟悉实验内容,按照规定的步骤操作,就能得到高分。

2.条件不成熟

也有的人认为,现在县里生物学科的师资短缺,教学设备落后,实验室不健全,将初中生物实验操作考试成绩计入中考总分的条件还不成熟,等各方面条件达到一定程度后,再纳入中考。

将初中生物实验操作考试成绩计入中考总分会给一些学校、教师带来一定的压力,但压力可以变成动力,能够尽快促进学校、社会、家长、教师以及学生本身对生物教学的重视,全面落实新课程标准的要求,树立素质教育的教育观、人生观。为学生的自主学习、积极成才提供广阔的空间。如果等到所有学校的师资都达标,所有的学校都有标准的生物实验室的时候,再把初中生物实验操作考试成绩计入中考总分,那可能会导致师资短缺的现象越来越严重,问题会越来越多,势必造成恶性循环。

三、2011年中考生物实验操作试题的几点说明

根据国家《基础教育课程改革发展纲要》的要求,为促进学生学习方式的转表,倡导以探索为核心的探究学习、自主学习、合作学习等多样化学习方式,教育局组织命题组认真研究和分析了我市以往初中生物实验操作考核的命题,依据《全日制义务教育生物课程标准(实验稿)》,提出了“突出实验能力考查,凸现实验教学的创新教育,有力促进实验教学”的命题指导思想。

本套生物实验操作试题共计4题,其中涉及到考查显微镜使用的试题有2题,解剖观察实验1题,探究实验1题,重在考查学生基本实验操作技能及探究能力、学习能力、解决实际生活问题的能力。与以往试题相比,本套试题有如下特点:

1.试题充分体现了层次感。如在有关显微镜的使用2道试题中,包含了三个不同的层次:第一层次是熟练使用显微镜;第二层次是在此基础上识别显微镜下的细胞;第三层次是学会制作临时装片并在显微镜下进行观察,这样真正达到了使学生在训练中循序渐进,逐步提高能力的目的。

2.试题凸现了新课标所要求的与生产、生活相结合的理念。如设计了“比较不同蔬菜中维生素C含量”的实验,培养学生运用生物学理论指导生活实际、生产实际的能力,为实验教学提供了明确导向——关注生活、关注社会,提高学生实践动手能力和科学实验素养。

3.试题在倡导探究性学习方面有所体现。“比较不同蔬菜中维生素C含量”实验体现了新课标所倡导的通过学习使学生在探究能力、学习能力和解决问题能力等方面有更好的发展这一科学理念。

4.结合本次中考实验的具体情况,命题组适当的增大了试题难度,并细化了评分标准。另外,我们在试题编制中把握了考试的公平性原则,命题组注意了4个题目间的难度差别,尽可能使每个题目的难度相当。实验记录由过去以回答知识性问题为主,改进为侧重对实验现象的观察记录、分析判断,要求学生根据自己观察到的实际现象真实记录实验结果,培养了学生实事求的科学态度。

总之,将初中生物实验操作考试成绩计入中考总分不是难为学生、给学生增加额外的学业负担,其宗旨是要督促各个学校将义务教育阶段的所有学科开足、开齐,特别是理科实验教学。理科实验操作考试成绩以20分记入中考的总成绩,这20分对每个学生、每个家长来说都至关重要,也会影响学校的教学质量和声誉。这种来自社会和家庭、学校生存的压力,会促使学校(教师)开(上)实验课。因此,现阶段增加理科实验操作考试,有助于中学生物学实验课的教学。通过实验操作考试,迫使学校从应试教育转向到素质教育上来,在课堂上增加学生动手操作的时间,从做中学,将新课程倡导的探究性学习落到实处

范文七:生物实验操作加试题

学校 姓名 班级 准考证号 座位号

实验一:制作临时装片标本

实验器材:显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、刀、吸水纸、滴管、碘液、纱布、清水、洋葱等。

监考老师:

实验组长

2014年5月 日

学校 姓名 班级 准考证号 座位号

实验二:探究食物在口腔中的化学变化

实验器材:试管、烧杯、温度计、量筒、酒精灯、三脚架、石棉网、玻璃棒、馒头、面粉、(制作淀粉糊)、碘液等。

监考老师:

实验组长

2014年5月 日

学校 姓名 班级 准考证号 座位号

实验三:观察小鱼尾鳍内血液的流动

实验器材:活的小鱼(尾鳍颜色要浅一些)、显微镜、培养皿、纱布等。

监考老师:

实验组长:

2014年5月 日

学校 姓名 班级 准考证号 座位号

实验四:酒精对水蚤心率的影响

实验器材:显微镜、载玻片、滴管、体积分数为75%的酒精、量筒、计时器等。

监考老师:

实验组长:

2014年5月 日

范文八:生物会考实验操作

高中生物会考实验操作(供学生使用) 试题 1:生物组织中脂肪的鉴定 考查项 目 操 作 要 求 满分值

制片

染色

观察 常规

(1)取一粒花生种子,去掉种皮。 (2) 用左手的三个手指夹住花生的一片子叶, 使花生子叶高于手指之上, 右手持刀片,将子叶削去一层,形成平面。 (3)刀口向内,与花生断面平行,滑行切薄片。 (4)将最薄的几片材料移到载玻片中央。 (1)在花生子叶上滴 2—3 滴苏丹Ⅲ 染液,染色 2—3min 。 (2)用吸水纸吸去花生子叶周围的染液。 (3) 在花生子叶上滴 1—2 滴 50%酒精, 用吸水纸吸去酒精, 并滴上 1—2 滴蒸馏水,盖上盖玻片。 (1)低倍镜下寻找花生子叶薄片的最薄处,移至视野中央,观察已着色 的圆形小颗粒。 (2)高倍镜观察目标。 显微镜复原,清洗器材,整理桌面。 试题 2:观察植物细胞的质壁分离

3分

3分

2分 2分

考查 操 作 要 求 满分值 项目 制作 取紫色洋葱鳞片叶外表皮一小方块,在洁净的载玻片上展 1分 装片 平,盖上盖玻片,制成装片。 观察 正确使用低倍镜, 观察正常洋葱表皮细胞, 找到有紫色液泡 2分 装片 的细胞。 (1) 从盖玻片一侧滴入 2—3 滴 0.3g/mL 蔗糖溶液, 另一侧用吸 质壁 水纸吸引,重复几次,操作正确。 2分 分离 (2)用低倍镜观察,找到发生质壁分离或正在发生质壁分离的 细胞。 (1)用高倍镜或低倍镜 ,找到比较清晰的发生质壁分离的细胞 , 绘图 移到视野正中央。 3分 (2)边观察边绘图,绘 1-2 个发生质壁分离的细胞。 常规 显微镜复原、清洗器材,整理桌面。 2分

绘出质壁分离图:

(www.wenku1.com)实验 3 观察植物根尖分生区细胞的有丝分裂

操 作 要 求 满分值

考察项目

一、根尖 的培养

实验前 3~4 天,让洋葱放在广口瓶上,底部接触清水。根长约 5cm 时可用。

(由教师 提前准备)

二、装片 的制作

上午 10 时至下午 2 时, 剪取洋葱根尖 2~3mm, 立即放入盛有质量分数为 15% 的盐酸和体积分数为 95%的酒精溶液的混合液(1:1)的玻璃皿中,室温下

1分

1.解离: 解离 3~5min。 2.漂洗: 待根尖酥软后,用镊子取出,放入盛有清水的玻璃皿中漂洗约 10 min。 3.染色: 把洋葱根尖放进盛有质量浓度为 0.01g/mL 或 0.02g/mL 的龙胆紫溶液的玻璃 皿中染色 3~5min。 4.制片: 用镊子将这段洋葱根尖取出来,放在载玻片上,加一滴清水,并用镊子尖把 洋葱根尖弄碎,盖上盖玻片,在盖玻片上再加一片载玻片。然后,用拇指轻 轻地压载玻片,使细胞分散开来。 三、观察 1.低倍镜 观察: 移走低倍镜,换上高倍镜,用细准焦螺旋和反光镜把视野调整清晰,仔细观 察,找出处于细胞

分裂期中期的细胞,再找出前期、后期、末期的细胞。 把装片放在低倍镜下,慢慢移动装片,找到分生区细胞。

1分 1分 2分

2分

2.高倍镜 观察:

四、 常 规

显微镜复原、清洗器材,整理桌面。

1分

绘出植物细胞有丝分裂中期简图:(2 分)

范文九:微生物实验室操作规程

微生物实验室操作规程【SOP 】 • 细菌室工作守则(微生物室 SOP 之一)

• 细菌室消毒隔离措施(微生物室 SOP 之二)

• 微生物实验室安全与防护(微生物室 SOP 之三) • 细菌室内质控制度(微生物室 SOP 之四)

• 细菌室操作技术规范(微生物室 SOP 之五)

• 无菌间规章制度(微生物室 SOP 之六)

• 菌(毒种)管理办法(微生物室 SOP 之七)

• 细菌室仪器维护保养及质控措施 (微生物室 SOP 之八) • 标准菌株保存及使用(微生物室 SOP 之九)

• 细菌室内务管理规定(微生物室 SOP 之十)

• 标本采集及保存要求 (微生物室 SOP 之十一) • 室内质控失控处理程序(微生物室 SOP 之十二) • 标本拒收标准(微生物室 SOP 之十三)

• 温度失控处理措施 (微生物室 SOP 之十四)

• 超净工作台作业指导(微生物室 SOP 之十五)

• 标本的接种和移种法(微生物室 SOP 之十六)

细菌室工作守则

(微生物室SOP 之一)

1.每日工作前用紫外线照射实验室半小时以上。

2.入室前应穿工作服,并做好实验前的各项准备工作。

3.实验室内应保持肃静,不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。尽量减少室内活动,以免引起风动,无关人员禁入。

4.非必要物品禁止带入实验室,必要资料和书籍带入后,应远离操作台。

5.做好标本的登记、编号及试验记录。未发出报告前,请勿丢弃标本。

6.标本处理及各项试验应在操作间进行,接种环用完后应立即火焰灭菌,沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。

7.实验时手部污染,应立即用过氧乙酸消毒或浸于 3%来苏儿溶液中 5-10分,再用肥皂洗手并冲洗干净;如误入口内,应立即吐出,并用 1:1000 高锰酸钾溶液或 3%双氧水漱口,根据实际情况服用有关药物。

8.实验过程中,如污染了实验台或地面,应用 3%来苏儿覆盖其上半小时,然后清洗;如污染工作服,应立即脱下,高压灭菌。

9.若出现着火情况,应沉着处理,切勿慌张,立即关闭电闸,积极灭火。易燃物品(如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等)必须远离火源,妥善保存。

10.工作结束时检查电器、酒精灯等是否关闭,观察记录培养箱、冰箱温度及工作情况,用有消毒液的抹布将操作台擦拭干净,并将试剂、

用具等放回原处,清理台面,未污染的废弃物扔进污物桶,有菌废弃物应送高压灭菌后处理。

11.离室前工作人员应将双手用消毒液消毒,并用肥皂和清水洗净。

12.爱护仪器设备,经常清洁,注意防尘和防潮。

细菌室消毒隔离措施

(微生物室SOP 之二)

1.每天工作前用消毒液消毒工作台,上班前、下班后开紫外灯(最少半小时)进行空气消毒。

2.非必要品禁止带入实验室,必要资料和书籍带入后,应远离操作台。

3.使用后的载玻片、盖片、平皿、试管等用消毒液浸泡,经煮沸后清洗或丢弃。

4.试验后的血液标本用消毒液浸泡后煮沸消毒,所有用于试验的反应板、吸头等用消毒液浸泡(至少 24 小时以上)后清洗或丢弃。

5.所有微生物培养物(细菌、支原体、真菌等培养物),不管标本阳性或阴性均用消毒液浸泡后,经煮沸消毒,才能清洗或丢弃。

6.取材、最好采用一次性工具,不能采用一次性工具者,每次取材前均应彻底消毒。

7.用于浸泡各种器械如刮菌刀、持物钳、镊子等的消毒液要定期更换。

8.不慎发生临床标本或培养物污染工作台,不要立即用水冲洗,应先用纸巾、布等敷料加上消毒液(如 5%石炭酸、3%来苏儿等)消毒 30 分钟以上,然后再清洗。如污染工作服,应立即脱下,高压灭菌。

9.实验时手部污染,应立即用肥皂洗手并冲洗干净,再外用消毒药水,如误入口内,应立即吐出,并用 1:1000 高锰酸钾溶液或 3%双氧水漱口,必要时根据实际情况服用有关

药物。

微生物实验室安全与防护

(微生物室 SOP 之三)

1.在工作区内禁止饮食,吸烟和存放食物及使用化妆品。

2.实验室里应保持整洁,不存放与工作无关的杂物。

3.工作台每天至少用消毒剂清洁一次,在溢渗传染物后要立即消毒、清洗;进入无菌室必须穿工作服,戴口罩、帽子。

4.在各种操作进程中均应尽量避免或减少气溶胶产生。

5.实验工作区禁止无关人员出入,尤其要严禁儿童进入。

6.工作人员在处理传染性物质或动物之后,以及在离开实验室时要洗手。

7.凡发生溢漏事故或接触传染性物质后,均应立即报告实验室监督员或实验室主任,并做好书面记录及采取相应措施。

8.结核杆菌的培养及标本涂片务必在生物安全柜里操作。

9. 有涉及感染性材料的操作应在生物安全柜中进行,如结核杆菌培养、感染性组织等。

10. 工作人员在进入实验室工作区前,应在专用的更衣室(或缓冲间)穿着背开式工作服或其它防护服。工作完毕后必须脱下工作服,不得穿工作服离开实验室。可再次使用的工作服必须先消毒后清洗。

11. 工作时必须戴手套(两副为宜)。一次性手套必须先消毒后丢弃。

12. 在实验室中必须配备有效的消毒剂、眼部清洗剂或生理盐水,且易于取用。可配备应急药品。

细菌室内质控制度

(微生物室SOP 之四)

1、每位工作人员必须加强质控意识,以质量控制工作为核心,认真做好各项质控试验和记录。

2、加强质量控制和专业理论知识的学习,规范操作,正确分析处理结果。

3、一旦发现失控,及时采取相应措施,纠正失控结果。

4、每天观察培养箱、冰箱的温度,并做好记录。

5、无菌间每周监测一次,紫外线消毒灭菌情况,并做好记录。

6、每月对高压蒸汽灭菌器、干热鼓风干燥箱进行一次灭菌效果监测。

生物检验室操作技术规范

(微生物室 SOP 之五)

1、微生物检验室工作人员均应具备细菌传染、消毒、灭菌知识。

2、微生物检验专业人员不断更新知识,了解微生物检验新进展。

3、每次发出的微生物报告应认真复审,分析报告、评价报告。

4、工作人员加强有菌观念,无菌操作。

5、当工作环境被细菌污染,必须立即消毒处理,报告主管人员,采取必要措施。

6、工作人员被细菌培养物污染应消毒处理,必要时给予药物治疗,并向主管负责人报告,采取特殊措施。

无菌间规章制度

(微生物室 SOP 之六)

1、每一个工作人员必须树立无菌观念,严格进行无菌操作。 在无菌室内必须戴帽子、口罩,进行无菌操作。

2、每天用紫外线消毒,每月检查一次紫外灯的无菌效果。

3、无菌室内各种废弃物品必须消毒。

4、实验完毕后,用含氯制剂 1000mg/L 消毒桌面、地面。

菌(毒种)管理办法

(微生物室 SOP 之七)

1. 菌种保管应有专人负责,保存于冰箱中,房门专人加锁,确保菌种安全。保管人员变动时,必须严格交接手续。

2、菌种应有严格的登记,包括形态,分离日期,鉴定日期,签发者,主要鉴定性能(包括形态、染色、抗原结构、动物致病力等),并注明使用、转移、销毁情况及原因。

3、各种菌种应按规定时间接种,一般在接种三次后作一次全面的鉴定,注意菌种有无污染及变异,如发现变异时,应及时更换。

4、菌种保存范围及向外单位转移,应按国家卫生部规定执行。

5、所有存在菌种应具备清单。

细菌室仪器维护保养及质控措施

(微生物室 SOP 之八)

我室主要仪器为 BacT/Alert 120、BACTEC9050 血培养仪和 Vitek32 、BD 凤凰全自动细菌鉴定和药敏分析仪,为了使仪器能够高质量的运行,使仪器报告的结果准确可靠,特制定以下仪器维护、保养和质控措施。

一、BacT/Alert 120 、BACTEC9050 血培养仪的维护、保养和质控措施

1.每天上班开始工作前和下班离开前要检查仪器的工作状态是否正常,仪器培养箱温度的报告里外是否一致。

2.每天用中性的清洁液将仪器表面擦拭干净

3.每天先做质控。

4.一个月至少做一次全程定标。

5.仪器检测数据每周星期六做备份。

6.仪器每一个月做一次彻底的清洁保养,包括清洁外壳、瓶孔、滤网等

7.仪器每年请工程师做一次检定工作。

二、Vitek32、BD 凤凰全自动细菌鉴定和药敏分析仪的维护、保养和质控措施

1.每天上班开始工作前和下班离开前要检查仪器的工作状态是否正常。

2.每天用中性的清洁液将仪器表面擦拭干净

3.购买的新批号的试剂都必须先做质控,质控合格后才能用于临床检测。

4.仪器检测数据每周星期六做备份。

5.仪器每一个月做一次彻底的清洁保养,包括清洁外壳、卡片架、滤网等

6.仪器每年请工程师做一次检定工作。

标准菌株保存及使用

(微生物室 SOP 之九)

概述:标准菌株是细菌室室内质控工作必不可少的、重要的生物资源,我室的标准菌株主要来自省临检中心的发放和从卫生部临检中心以及国家菌种保存中心购买所得,为了让标准菌株能够得到合理的应用,特制定以下规定。

1.对每批购买的标准菌株要做好登记,包括菌种的菌名、编号、购买

时间、保存地点、记录人等

2.每次使用标准品都应作好使用记录,包括标准品的名称、编号、使用时间等。

3.购买的标准品初次使用时,应大量增殖,然后分装在含 10-15% 甘油的胰蛋白胨肉汤中,20℃以下保存。

4.新的标准菌株复苏最多不得超过三次,如超过三次将不在视为标准菌株使用。

5.标准菌株保存管一经溶化使用后,不得再次冻存。

细菌室内务管理规定

(微生物室 SOP 之十)

1.细菌室岗位分工与职责管理规定

1.1 概述

鉴于细菌室工作琐碎烦杂且千头万绪,为了使细菌室的工作能够保质保量地顺利完成,特将细菌室暂定为两个岗位,以明确工作范围、增强责任心、便于日常工作的完成。当然由于细菌室不同岗位工作量的随机性较大,故我室要求大家发扬既分工,又协作的精

神,共同完成细菌室工作。

1.2 岗位职责

各岗位工作人员要求严格按照作业指导书进行操作,高质量的完成本岗位工作,如遇到问题须提出经讨论解决。

1.3 岗位分工

岗位Ⅰ:完成细菌培养标本(Ⅱ号菌培养除外)的结果观察处理及报告发放。

岗位Ⅱ:完成仪器的维护、保养和质控工作等。

2.细菌室记录内容明细

2.1 环境条件

室内温度、湿度,每天一次,上午记录。

2.2 恒温设备 2.3

孵箱、普通冰箱,每天一次,上午记录。

2.3 分析仪器

常规每日保养一次,发现问题随时详细记录;质控按要求测试完毕后,及时手工记录。

2.4 标本与结果

不合格标本记录、危急值报告记录、结果记录。

2.5 岗位记录(附表:细菌室岗位记录表)

2.6 其它记录,如交班记录等。

3.细菌室室内环境条件控制范围

温度 18~28℃,湿度 20~80%。

标本采集及保存要求

(微生物室 SOP 之十一)

1 总则:用于细菌培养的标本在收集时应注意严格无菌操作和及时送检,检测后标本应妥善保存。

2.临床标本的采集

2.1 下呼吸道分泌物(痰液)

令患者早上起床后用清水濑口,不要刷牙,立即从下部呼吸道咳出第一口痰,吐在无菌塑料痰盒中,及时送检。

2.2 尿液(中段尿)

护理人员协助采取中段尿约 3ml 入无菌试管中,及时送检。

2.3 粪便:取有粘液、脓血部分的粪便置玻璃大便专用管中,如为稀水便,可直接收集于玻璃管中,及时送检。

2.4 眼、耳、鼻、喉拭子:将棉拭子沾取少许无菌生理盐水(如沾取的太多,可在无菌生理盐水瓶壁上挤去多余的水份),然后采取可疑部位的分泌物,倒悬于无菌试管内,及时送检。

2.5 脓液:用沾有生理盐水的棉拭子沾取脓液,要尽量多取一些,然后将棉拭置于无菌试管中,及时送检。

2.6 血液:

2.6.1 凡怀疑菌血症和败血病的患者,采血培养时,应尽量在未使用抗菌素前采血,如已使用抗菌素,应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血,应 在病人第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。当然在病人发热或寒颤时采集也可。

2.6.2 成人每次采血 5—10ml,小儿采血 2—3ml;

2.6.3 严格消毒病人采血部位和血培养瓶口,抽一定量血液后,无菌注入血培养瓶内,轻轻摇匀,

2.6.4 从抽血到接种入瓶,动作要快,防止血液凝固,同时要及时送

检。

2.7 穿刺液:胸腹水、心包液、关节腔液、鞘膜积液:

严格无菌抽取后,注入含肝素抗凝的无菌试管中,轻轻颠倒试管 10 余次,使肝素与穿刺液混匀达到抗凝的目的,或直接无菌注入血培养瓶内及时送检。

2.8 胆汁:由专科医生以无菌方法取引流液 10ml 注入无菌试管。

2.9 脑脊液:以无菌方法取脑脊液 35ml,置无菌试管内,常温保存送检,如只做培养可直接无菌注入血培养瓶内,及时送检。

2.10 生殖器官标本:阴道、子宫颈及前列腺等分泌物应由医师采集,收集于无菌试管内送检。如疑为淋病奈瑟菌感染,做培养检查时,采集的标本应床旁接种并及时放入孵箱培养。

2.11 烧伤标本:以无菌棉拭子直接采取多个部位创面的脓汁分泌物放入无菌试管中.

2.12 支原体(解脲、人型)培养+药敏的标本采集

2.12.1.支原体对干、热抵抗力差,标本采集后应尽快接种支原体运送培养基送检。

2.12.2 男性:用细的无菌棉拭子沾取无菌盐水少许深入尿道口内

2.53cm。

3.临床标本的保存

细菌室标本原则上要求及时送检、及时处理,不得保存。

室内质控失控处理程序

(微生物室 SOP 之十二)

一、BacT/Alert 120 血培养仪室内质控处理程序

1.当 BacT/Alert 120血培养仪质控失败时,仪器会提示你对该瓶孔进行定标,通常定标都能通过,只要定标过了,仪器就能正常工作。 如仪器定标不能通过,就要请厂家工程师对仪器进行检测,并对仪器的有关参数进行调整,直到仪器合格后才能进行日常工作并填写失控报告。

2.每批新购买的试剂必须进行室内质控,当质控结果不能符合要求时,应通知组长协助处理,进行失控原因分析。

2.1 失控的原因分析

2.1.1 自身原因

2.1.1.1 质控菌株、卡片、无菌盐水等出现质量问题。

2.1.1.2 质控菌株不符合所检测卡片的要求。

2.1.1.3 上卡操作中出现问题,如菌液浓度不准等

2.1.1.4 仪器工作是否正常。

2.1.1.5 室温是否符合分析要求。

2.2 失控的处理

2.2.1 操作不规范时应严格按作业指导书重新检测一次。仍失控进行下一步。

2.2.2 检查质控菌株及卡片是否在有效期内,质量如何?无菌盐水是否被污染以及标准菌株是否符合卡片的要求等。在保证质控菌株、卡片、无菌盐水等符合要求的情况下仍失控则进行下一步。

2.2.3 做可能影响检测的仪器相应部分保养,仍失控进行下一步。

2.2.4 请仪器工程师分析,写失控报告。直到质控在控后重新检测。

标本拒收标准

(微生物室 SOP 之十三)

1.支原体培养、鉴定、计数、药敏操作:若送检标本不是运送培养基送检则为不合格标本。

2.找抗酸杆菌:穿刺液标本如发现严重凝固则拒收。

3.脑脊液培养:如标本为非无菌管采集则拒收。

4.中段尿培养:如标本为非无菌管采集则拒收。

5.下呼吸道标本培养:挑取痰标本直接涂片镜检,WBC<10/LP,上皮细胞>25/LP 不适合做细菌培养。

6.脓液及创伤分泌物培养:如标本为非无菌管采集则拒收。

7.穿刺液培养:如标本为非无菌管采集则拒收。

8.生殖道分泌物培养:如为淋球菌培养没有直接接种到淋球菌培养基上则拒收。

9.各类培养标本原则上都要求无菌采集并及时送检、及时接种、及时培养,不能保存。

除非特殊情况可置于冰箱保存,对分离怕冷的细菌时,应注意标本的保暖。

温度失控处理措施

(微生物室 SOP 之十四)

1.每天上班记录培养箱、冰箱的温度于温度记录本上,如发现普通培养箱的温度超过37℃(不包括 37℃)或低于 34℃(不包括 34℃);真菌培养箱温度超过 31℃(不包括31℃)或低于 25℃(不包括 25℃);冷藏冰箱的温度超过 8℃(不包括 8℃)或低于 2℃(不包括 2℃);冷 冻冰箱的温度超过10℃(不包括10℃)或 低于30℃(不包括30℃),应立即追溯其失控的时间和原因。

1.1 如失控的原因可以马上纠正(如冰箱断电、冰箱门未关好、温控调节器未正确控制、冰箱严重结霜、温度计损坏等),则由本室人员马上纠正并填写失控报告。

1.2 如冰箱、培养箱本身出现机械故障,本室人员应马上通知维修部或维修商,同时根据排除故障时间的长短是否会对其中的物品质量造成影响而采取相应的措施( 如把里面的物品转移到能满足需要条件的环境中),并填写失控报告单。

2.培养箱中的培养物应全部拿到工作台,检查培养物的生长情况。

2.1. 如果培养基的菌落生长良好,则按常规程序进行检验。

2.2.如果培养基的菌落生长受抑制,则取标本重新接种,如标本确实无法再次接种,则应与临床医生联系、解释并请医生重新采集标本送检。

2.3.如有细菌生长,则应补做药敏试验,并填写《迟发报告单记录表》,并写明原因。

3.故障处理过程中应及时贴上红色标识,并在温度记录本上用红笔记录失控的温度度数,故障处理后应利用培养箱、冰箱的温度调节器,把温度调回到规定范围的中值,并把专业人员的检查的结果记录在仪器档案袋中。另外还需填写《内部质量控制失控报告单》,当温度再次是失控时,再次记录温度的读数,并且上报负责人。

超净工作台作业指导

(微生物室 SOP 之十五)

1. 目的 规范净化工作台操作与维护工作,确保仪器正常运作。

2. 适用范围:本实验方法适用于微生物检验中净化工作台操作与维护管理。

3. 检验人员职责:负责此仪器操作和维护管理

4. 操作及维护规程

4.1 操作规程

4.1.1 使用工作台时,应提前 50 分钟开机,同时开启紫外杀菌灯,处理操作区内表面积累的微生物,30 分钟后关闭杀菌灯(此时日光灯即开启),启动风机。

4.1.2 对新安装的或长期未使用的工作台,使用前必需对工作台和周围环镜先用超静真空吸尘器或用不产生纤维的工具进行清洁工作,再 采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。

4.1.3 操作区内不允许存放不必要的物品,保持工作区的洁净气流流型不受干扰。

4.1.4 操作区内尽量避免作用明显扰乱气流流型的动作。

4.1.5 操作区的使用温度不可以超过 60℃。

4.2 维护规程及维护方法

4.2.1 根据环境的洁净程度,可定期(一般 2~3 个月)将粗滤布(涤纶无纺布)拆下清洗或给予更换。

4.2.2 定期(一般为一周)对环境周围进行灭菌工作,同时经常用纱布沾酒精或丙酮等有机溶剂将紫外线杀菌灯表面擦干净,保持表面清洁,否则会影响杀菌效果。

4.2.3 当加大风机电压已不能使风速达到 0.32m/s 时必须更换高效空气过滤器。

4.2.4 更换过滤器时,可打开顶盖,更换时应注意过滤器上的箭头标志,箭头指向即为层流气流向。

4.2.5 更换高效过滤器后,应用Y094型尘埃粒子计数器四周边框密封是否良好,调节风机电压,使操作区平均风速保持在0.320.48m/ s范围内,再用 Y094型尘埃粒子计数器检查洁净度。

标本的接种和移种法

(微生物室 SOP 之十五)

接种标本是细菌实验室的一项基本操作技能,目 的是使细菌能得到充分的生长和能分离出单个菌落获得纯培养而供分析鉴定之用,所以作此项技术的操作应按以下方式进行:

1.左手的操作要点:左手负责持平板、试管、烧瓶等物品,操作中,

左手应尽量减少摆动,否则,不利于保持物品的无菌状态。

1.1 左手持物品时,最好固定在一个空间方位上,以避免因移动使空气中的细菌进入器皿,造成随机性污染。

1.2 所持的器皿其开口尽量避免向上,持平皿时,可以让平板的表面与地面尽量垂直,试管与器皿烧瓶也可倾斜。当 从标本器皿或平板上挑取接种物或菌落后应立即塞上试管塞或扣上平皿,随即接种标本。

2.右手的操作要点:握有接种工具的右手,将接种环或针沿伸到标本之前应作好接种环或针,镊子等工具的火焰消毒工作,待冷却后才沿伸到标本容器中挑取接种物,在挑取标本后,其接种工具应尽量避免接触试管壁及试管口等。随后将接种物在培养基上分离划线。

3.移种或接种的基本步骤:

3.1 右手持接种工具,在火焰上烧灼 3 次灭菌。

3.2 左手持起标本容器或原代培养物的平皿或试管等。

3.3 用接种工具挑取适量标本或细菌,挑取标本时,应注意选择真实反映感染情况的部分,如粪便挑取粘液脓血部分。纯化细菌应从原代培养物上挑取单个菌落。从液体培养基中取菌,只需将接种环在培养液中蘸取一环即可。

3.4 接种时可根据要求采用不同的接种方法。

3.5 接种后,应在火焰上反复烧灼接种工具并作一定的编号记录,所用工具应放回原处。__

范文十:生物实验操作步骤

目 录

生物实验操作考试练习题

(一)A类操作练习题(8分)

1.用显微镜观察洋葱鳞片叶表皮细胞

2.用显微镜观察人的口腔上皮细胞

3.用显微镜观察人的口腔上皮细胞永久装片并绘制细胞结构图

(二)B类操作练习题(3分)

1.认识显微镜的结构

2.用显微镜观察玻片标本

3.制作洋葱鳞片叶表皮细胞临时装片

4.制作人的口腔上皮细胞临时装片

5.制作番茄果肉细胞临时装片

6.观察菜豆种子的结构

7.探究种子中是否含有水分

8.探究玉米种子中是否含有淀粉

9.探究种子中是否含有无机盐

10.探究果汁中是否含有维生素C

11.探究人体呼出与吸入气体中二氧化碳含量的变化

12.探究人体呼出与吸入气体中氧气含量的变化

生物实验操作考试练习题

一、生物实验A类操作练习题

1.用显微镜观察洋葱鳞片叶表皮细胞

实验器材及设置:显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸、纱布、滴管、单面刀片、镊子、清水、稀碘液、解剖针、小块木板、洋葱

鳞片叶、污物杯、擦镜纸(备用)。

[附]显微镜状态:显微镜要对好光,视野明亮,物镜前端与载物台约保持2厘米的距离。

实验要求:

(1)制作洋葱鳞片叶表皮细胞临时装片;

(2)用显微镜观察洋葱鳞片叶表皮细胞。

方法步骤

评分标准:

1.不擦拭的扣1分。

2.不滴或错滴成稀碘液等的扣1分。

3.盖玻片直接平放扣1分。

4.不染色或方法错误扣1分。

5.不用压片夹压玻片的扣1分。

6.不从侧面看着物镜下降或玻片被压碎均扣1分,两处都错的也只扣1分。

7.看不到表皮细胞物像的扣1分。

2.用显微镜观察人的口腔上皮细胞

实验器材及设置:显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸、纱布、滴管、镊子、消毒牙签(一端尖,一端钝)、稀碘液、生理盐

水(0.9%氯化钠溶液)、一次性杯子、污物杯、垃圾桶、擦镜纸(备用)。

[附] ]显微镜状态:显微镜要对好光,视野明亮,物镜前端与载物台约保持2厘米的距离。

实验要求:

(1)制作人的口腔上皮细胞临时装片;

(2)用显微镜观察人的口腔上皮细胞。

方法步骤

评分标准:

1.不擦拭的扣1分。

2. 刮牙缝等处扣1分。 3.不漱口、不滴或错滴成稀碘液等的扣1分。

4.盖玻片直接平放扣1分。

5.不染色或方法错误扣1分。

6.不用压片夹压玻片的扣1分。

7.不从侧面看着物镜下降或玻片被压碎均扣1分,两处都错的也只扣1分。

8.看不到表皮细胞物像的扣1分。

3. 用显微镜观察人的口腔上皮细胞永久装片并绘制细胞结构图

实验器材及设置:显微镜、人的口腔上皮细胞永久装片、铅笔、尺子、橡皮。

[附]显微镜状态:目镜已安装好,最大光圈对准通光孔,转换器上两个物镜位于通光孔两侧,呈外八字形,镜筒降到最低处。

实验要求:

(1)用显微镜观察人的口腔上皮细胞永久装片

(2)绘制人体口腔上皮细胞结构图,并注明各部分结构名称

方法步骤

整理器材:显微镜恢复到实验前状态.

二、生物实验B类操作练习题

1.制作洋葱鳞片叶表皮细胞临时装片

实验器材及设置:载玻片、盖玻片、吸水纸、纱布、滴管、单面刀片、镊子、清水、稀碘液、解剖针、小块木板、洋葱鳞片叶。

实验要求:制作洋葱鳞片叶表皮细胞临时装片

方法步骤

2.制作人的口腔上皮细胞临时装片

实验器材及设置:载玻片、盖玻片、吸水纸、纱布、滴管、镊子、消毒牙签(一端尖,一端钝)、稀碘液、生理盐水(0.9%

氯化钠溶液)、一次性杯子。

实验要求:制作人的口腔上皮细胞临时装片

方法步骤

3.观察菜豆种子的结构

实验器材及设置:浸软的菜豆种子(或黄豆等其他双子叶植物的种子)、单面刀片、镊子、培养皿、解剖针(可用牙签代替)。

实验要求:

(1)解剖菜豆种子;

(2)用解剖针指示出胚的各部分结构。

方法步骤

4.探究种子中是否含有水分

实验器材及设置:晒干的小麦种子、干燥的试管、试管夹、火柴、酒精灯、药勺。

实验要求:用上述材料用具,探究种子中是否含有水分。

方法步骤

5.探究种子中是否含有淀粉

方法一:

实验器材及设置:浸泡过的玉米种子、单面刀片、碘液、小木块、培养皿。

实验要求:用上述材料用具,探究种子中是否含有淀粉。

方法步骤

方法二:

实验器材及设置:小麦面粉、纱布、烧杯(100ml左右)、清水、碘液、药勺、培养皿。

实验要求:用上述材料用具,探究种子中是否含有淀粉。

方法步骤

6.探究种子中是否含有无机盐

实验器材及设置:浸软的小麦种子、解剖针、酒精灯、火柴。

实验要求:用上述材料用具,探究种子中是否含有无机盐。

方法步骤

7.探究人体呼出与吸入气体中二氧化碳含量的变化

方法一:

实验器材及设置:澄清的石灰水、试管2支、塑料吸管、洗耳球、试管架、量筒(20ml左右)。

实验要求:用上述材料用具,探究人体呼出与吸入气体中二氧化碳含量的变化。

方法步骤

方法二:

实验器材及设置:澄清的石灰水、塑料吸管、广口瓶2个(带盖,200mL左右)、量筒(20ml左右)。

实验要求:用上述材料用具,探究人体呼出与吸入气体中二氧化碳含量的变化。

方法步骤

8.用显微镜观察人血的永久涂片(根尖的永久纵切片、玉米茎的永久横切片、椴树茎的永久横切片等)

实验器材及设置:显微镜、人血的永久涂片、根尖的永久纵切片、玉米茎的永久横切片、椴树茎的永久横切片、纱布、擦镜纸(备

用)。

[附]显微镜状态:目镜已安装好,最大光圈对准通光孔,转换器上两个物镜位于通光孔两侧,呈外八字形,镜筒降到最低处。

实验要求:用显微镜观察人血的永久涂片(根尖的永久纵切片、玉米茎的永久横切片、椴树茎的永久横切片等)

方法步骤

9.练习使用显微镜

实验器材及设置:显微镜、擦镜纸(备用)。

[附]显微镜状态:目镜已安装好,最大光圈对准通光孔,转换器上两个物镜位于通光孔两侧,呈外八字形,镜筒降到最低处。

实验要求:(1)取镜与安放;(2)对光。

方法步骤